mirna182对成年大鼠药物性聋损伤保护及机制.docx

miRNA-182 对成年大鼠药物性聋损伤的保护及机制
硕士研究生:闫 辉
导 师:邱建华 教授辅导教师:陈福权 教授
第四军医大学西京医院耳鼻咽喉-头颈外科,西安 710032
资助基金项目:国家自然科学基金青年项目(81100713) 国家自然科学基金海外重大合作项目(81120108008) 国家“973”项目课题(2011CB504505)资助
中文摘要
实验一 硫酸卡那霉素联合呋塞米注射液快速致聋动物模型的建立
目的
通过建立快速药物性聋动物模型,观察硫酸卡那霉素与呋塞米注射液联合用药对正常 SD(Sprague-Dawley)大鼠的听力学及形态学的影响。
方法
32 只雌性大鼠腹腔注射硫酸卡那霉素(500mg/Kg),30 分钟后再经腹腔注射呋塞米注射液(),正常对照组经腹腔注射给予等量生理盐水。各组实验动物分别于给药后 1 天、7 天、14 天行脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR) 检测,并别行基底膜铺片、免疫荧光染色,扫描电镜观察。
结果
联合注射呋塞米与硫酸卡那霉素后,药物致聋组大鼠 ABR 阈值明显提高,对照组 ABR 均正常;铺片观察发现外毛细胞有部分缺失,其中以底转缺失较为明显,内毛细胞损伤程度较轻。
结论
该药物浓度及给药方法引起的形态学改变,以底转外毛细胞部分缺失为主,但底转并不会完全缺失。与单纯给予硫酸卡那霉素或庆大霉素给药造聋相比,可明显缩短给药致聋的时间,且更安全、有效,为耳蜗毛细胞损伤的保护等实验研究提供了一种简单、快速而有效的大鼠耳聋的动物模型。
实验二 miRNA-182 圆窗龛给药的观察研究
目的
了解 miRNA-182 及其稀释剂 RNase-free water 经圆窗给药在耳蜗内的分布及其对毛细胞的影响。
方法
24 只雌性 SD 大鼠分为三组,每组 8 只。即:A 组:miRNA-182(带 cy3 荧光标记)组、B 组:单纯 RNase-free water 组、C 组:单纯手术组。每只实验动物双耳均行手术。术中每组给予对应处理,给药剂量及方式均相同。各组实验动物于手术后 12 小时、24 小时及 48 小时完善 ABR 检测,术后 24 小时行扫描电镜检查,术后 48 小时行基底膜铺片,并分别于术后 24、48 小时各留取 miRNA-182 组一只耳蜗行冰冻切片。
结果
单因素方差分析可知,三组实验动物给药致聋后各时间点 ABR 的反应阈值及各组手术前后 ABR 阈移均无统计学差异(P>)。各组基底膜铺片及扫描电镜均形态正常,无缺失。根据耳蜗冰冻切片可知,miRNA-182 组术后 24 小时的 miRNA-182 在耳蜗血管纹、corti 器上分布较术后 48 小时更为显著。
结论
经圆窗龛给予 miRNA-182 于术后 24 小时在耳蜗血管纹及 corti 器上分布较 48
小时更为显著,且对大鼠听力学及形态学无损伤作用。
实验三 miRNA-182 对大鼠药物性聋损伤的保护作用及其机制
目的
研究 miRNA-182 对大鼠药物性聋损伤的保护作用。方法
24 只雌性 SD 大鼠随机分为三组,每组 8 只。即:A 组:miRNA-182 组、B 组:
溶媒剂(RNase-free water)组、C 组:空白对照组。A、B 两组经圆窗分别给予 miRNA-182 及 RNase-free water,术后 24 小时,以上三组实验动物均完善脑干诱发电位(ABR)检测,检测结束后当天将以上三组实验动物按公斤体重先给予硫酸卡那霉素 500mg/Kg,腹腔注射一次,30-45 分钟后给予呋塞米注射液 ,腹腔注射一次。各组实验动物分别于给药致聋后 1 天、7 天、14 天行 ABR 检测,并于第 14 天最后一次 ABR 检测结束后当天各组均随机各抽取 1 只实验动物,行扫描电镜检
查、全耳蜗基底膜铺片、颞骨冰冻切片及免疫荧光染色,另取 2 只行毛细胞缺失率计数。
结果
ABR 结果显示,空白对照组及溶媒剂组在给药致聋后的各时间点的阈值比较无显著性差异(P>);空白对照组与溶媒剂组两者比较,各时间点也无显著性差异
(P>);miRNA-182 组与空白对照组、miRNA-182 组与溶媒剂组两者之间比较各时间点均有显著性差异(P<);miRNA-182 组给药致聋后的各时间点的阈值比较无显著性差异(P>)。
同时,miRNA-182 组与空白对照组、miRNA-182 组与溶媒剂组相比,前者与后者给药致聋前后各时间点的 ABR 阈移有显著性差异(P<);溶媒剂组与空白对照组相比,两组给