s14g-humanin对阿尔茨海默病转基因小鼠的治疗作用及其相关机制分析.docx

缩略语表
缩略词
AD
英文全称
Alzheimer’s disease
中文全称
阿尔茨海默病
Aβ
SP
amyloid-beta protein
senile plaques
β-淀粉样蛋白老年斑
APP
IL-1β
amyloid precursor protein
interleukin-1β
淀粉样前体蛋白
白细胞介素-1β
IL-6
TNF-α
interleukin-6
tumor necrosis factor-α
白细胞介素-6
肿瘤坏死因子-α
PS-1
PS-2
Presenilin-1
Presenilin-2
早老素-1
早老素-2
Th-S
WT
Thioflavin-S
Wild type
硫磺素-S
野生型
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S14G-Humanin 对阿尔茨海默病转基因小鼠的
治疗作用及其相关机制研究
硕士研究生:张文均
导 师:苗建亭 教授第四军医大学唐都医院神经内科,西安 710032
中文摘要
研究背景和目的:
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是近年来老年人最常见的神经系统变性疾病,其主要的病理学特点表现为形成老年斑、海马锥体细胞的颗粒空泡变性、神经原纤维的缠结、轴索、突触异常的断裂以及神经元的减少。该病起病比较隐匿,常伴有进行性的记忆减退和人性格的改变。到目前为止,其确切的病因和明确的发病机制尚不清楚,目前大量的研究结果显示脑内β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)在脑内聚集并且纤维化和沉积形成老年斑以及 Aβ对他周围的突触和神经元的毒性作用导致 AD 产生和发展。S14G-Humanin(HNG)是 Humanin(HN)的合成衍生物,体外研究表明该药品具有极强的神经保护功能,在动物体内初步的研究也证实 HNG 可有效改善侧脑室注射 Aβ后所导致的认知功能障碍。然而迄今为止,HNG 对于成年 AD 转基因小鼠已有大量 Aβ斑块沉积时的治疗作用及其相关机制仍不明确,因此,深入阐明 HNG 在 AD 发病过程中的治疗作用及其相关机制有助于探索新的 AD 治疗方法,并为其应用提供相应的实验基础和理论依据。本项实验我们将通过应用九月龄的阿尔茨海默病 APPswe/PS1dE9 转基因动物模型(APPswe/PS1dE9 转基因小鼠),使用 HNG 疗法治疗 3 月,通
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过评定其行为学以及脑内的不同种类 Aβ和胶质细胞及炎症细胞的变化进行
相关分析,进一步阐明 HNG 疗法对已有大量 Aβ斑块沉积的 AD 症的疗效及相关机制。
研究方法:
本项实验以九月龄成年 APPswe/PS1dE9 雌鼠和与之相匹配的常规同窝野生鼠(WT)为对象,随机分为以下 4 组(每组 8 只小鼠):APPswe/PS1dE9
+HNG 治疗组,APPswe/PS1dE9+生理盐水治疗组,野生型+HNG 治疗组, 和野生型+生理盐水治疗组。分别给予 HNG 和等体积的生理盐水腹腔注射治疗 3 个月,然后通过 Morris 水迷宫,免疫组织化学,荧光染色和 ELIST 等方法检测小鼠的空间学****记忆能力及不同种类 Aβ和胶质细胞及炎症细胞的变化,并应用相关统计学方法深入探讨 HNG 在 AD 中的治疗作用及其相关机制。
研究结果:
(1)Morris 水迷宫试验定位航行实验中,与 WT+生理盐水治疗组和 WT+HNG 治疗组相比,APPswe/PS1dE9+生理盐水治疗组的潜伏期明显延长
(P<),而与 APPswe/PS1dE9+生理盐水治疗组相比,APPswe/PS1dE9
+HNG 治疗组的潜伏期显著缩短(P<)。在 Morris 水迷宫空间探索实验中,与 WT+生理盐水治疗组和 WT+HNG 治疗组相比,APPswe/PS1dE9+生理盐水治疗组在目标象限停留时间明显缩短( P< ), 而与 APPswe/PS1dE9+生理盐水治疗组相比,APPswe/PS1dE9 +HNG 治疗组在目标象限停留时间显著延长(P<)。
(2)使用免疫组织化学和Th-S荧光染色方法分别检测APPswe/PS1dE9+ 生理盐水治疗组和APPswe/PS1dE9+HNG治疗组小鼠脑内Aβ斑块和纤维性 Aβ斑块沉积情况。与APPswe/PS1dE9+生理盐水治疗组相比, APPswe/PS1dE9+HNG治疗组小鼠脑内皮层中Aβ斑块沉积面积及纤维性Aβ斑块沉积面积的百分比均显著减少(P<),海马中Aβ斑块沉积面积及纤
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维性Aβ斑块沉积面积的百分比也显著减少(P<)。
(3)使用ELISA方法检测APPsw