石油化工紧急停车及安全联锁系统设计导则.docx

摘 要
摘 要
从血浆中分离纯化各种药用蛋白质仍然是生物技术的重要产业,而高纯度微量血浆蛋白制品的开发是血液制品发展的一个不容忽视的趋势;其中抗凝血酶Ⅲ(AT一Ⅲ)是体内最重要的抗凝血物质,占血浆中总抗凝血酶活性的50一60%。AT一Ⅲ是一种含糖10%的单链啦糖蛋白,相对分子量为58~64KD,由432个氨基酸组成,是人血浆中主要的生理性凝血酶抑制蛋白“’。A卜IIJ制剂自1974年试用于临床以来,其疗效肯定,适应症日益增多,特别是预防和治疗肝肾疾病、弥漫性血管内凝血(DIC)等症。1。分离纯化AT一Ⅲ的技术受到人们的普遍重视和关注。层析法以其特有的选择性和灵活性在血浆蛋白的分离纯化中起着举足轻重的作用,它已成为获得某些较高纯度微量血浆蛋白不可或缺的方法。
综观AT一Ⅲ的分离纯化历史,除了最初采用氢氧化铝、磷酸钙吸附、离子交换层析等制备方法外,自1970年以来,AT一Ⅲ的制各方法中都至少用了一次肝素亲和层析o ,缩短了流程,提高了收率和纯度。因而在AT一Ⅲ的分离纯化过程中,肝素亲和层析是关键步骤。目前在国内此类亲和介质主要依靠进口,价格昂贵(约300元瓜),制备方法保密,使得AT—m 分离纯化的成本很高,难以实现产业化。因此,研究制备肝素亲和层析介质具有重要意义。肝素亲和层析介质的制备方法~般包括载体的活化和偶联两个步骤。姜世明等人”1利用 Pharmacia公司的Sepharose 4B为基质,采用环氧***丙烷活化,然后将其直接和肝素偶联, 制得肝素一琼脂糖凝胶:这种方法利用环氧基与肝素上的氨基反应,由于肝素分子上有多个氨基,会发生多点结合,使得肝素分子的天然构型发生变化,从而在一定程度上会影响分离纯化效果。本文采用另一种偶联方式,即环氧***丙烷活化的琼脂糖凝胶经过***化过程后,利用还原***化反应,***化后的介质和肝素的末端醛基反应,能确保其它基团的完整性,而不影响肝素的亲和活性。另外,本研究采用自制的琼脂糖凝胶6FF介质,这种基质交联度比较高, 具有很好的机械强度,可在高流速的条件下使用。将肝素(Heparin)作为配基偶联到实验室自制的琼脂糖凝胶6FF上,在得到肝素一琼脂糖凝胶6FF介质后,将其用于人血浆中AT一Ⅲ的分离纯化,得到了与进口介质相当的分离效果,说明用这种方法制备的介质与AT一Ⅲ等生物活性分子之间具有良好的亲和活性,为系列琼脂糖凝胶介质的国产化奠定了基础。
关键词:血液制品,分离纯化,亲和层析,抗凝血酶Ⅲ,肝素一琼脂糖凝胶6FF
中图分类号:0657 文献标识码:A
摘 要
The preparation of heparin-agarose geI 6FF and itS appIication in the
purificatiOn Of antithrombinⅢ
Mu Cheng-hua(Guizhou University)
SuperVised by Professor LL~N Bin,MA Guang—hui
Abstralct
It is still technical and important industry of 1 iving creature to separate and withdraw various medicine protein in the blood plasma, and the research and development of the trace blood plasma protein product of the high pure degree is an
important trend to develop the therapeutic theⅡL the antithrombin Ⅲ(AT一Ⅲ)is the most important anticoagulantⅢaterial inside the bodyJ accuping by 50一60%in the total anticoagulant enzyⅢe AT一Ⅲis one of a group of a 2一dycoproteins that contains 10%clycon,constituted by 432 alllino acidses.
Its opposite molecular weight is 58~64 KDs and it is the main anticoagula兀t protein to inhibit thrombin in blood plasⅡla in physiology n1. The curative effect of the AT一ⅢDroduct is