香烟烟雾冷凝物对肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响.docx

内蒙古医科大学硕士研究生学位论文(2015)

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中文摘要
目的:香烟烟雾中含有许多有害的化学物质,是多种疾病的重要诱发因素之一,被公认
为是引起肺间质疾病的主要危险因素。香烟烟雾相关肺间质性疾病的分子机制尚不清
楚,临床上肺间质纤维化也缺乏有效的治疗方法。近年来关于香烟烟雾对肺成纤维细胞
分化和增殖的影响机制受到人们的关注。本实验中使用的 WI-38 细胞为体外培养的人胚
肺二倍体成纤维细胞,用不同浓度的香烟烟雾冷凝物(Cigarette smoke condensate, CSC)
分别对转化生长因子β1(transforming

growth

factor-β1,TGF-β1)诱导下的成纤维细
胞进行干预,通过检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的含量及
吸光度值来反映 CSC 对肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化进程及增殖的影响,目的在于
探讨香烟烟雾参与肺间质相关疾病的可能机制。
方法:体外培养人胚肺成纤维细胞来源的 WI-38 细胞,取对数生长期的细胞进行实验。
香烟烟雾冷凝物的制备是参考 Carp and Janoff [1]最早使用的某种特殊装置来实现的。通
过这个装置完成两支香烟的抽吸,待烟雾在培养基中溶解,调整合适的酸碱度,除去多
余的大颗粒和细菌,根据实验分组用培养基稀释至若干浓度组,原则上用于实验的时间
应控制在 30min 内。本实验首先尝试应用 0%、%、5%、%、10%、%浓度的香
烟冷凝物培对培养的细胞进行干预,每组均加入等量 5μg·L-1 的 TGF-β1。通过显微镜
观察细胞形态,ELISA 法检测细胞中α-SMA 的水平。依据其结果选定合适的浓度进行
实验分组,实验分为空白对照组、5%CSC 组、%CSC 组、10%CSC MTT 法测
定细胞活力。
结果:
1、显微镜下观察 WI-38 细胞在不同浓度 CSC 干预下形态学变化:显微镜下观察结果为:
空白组的成纤维细胞胞体较大,细胞形态呈纺锤型或星型;而试验组细胞则表现为扁平
状纤维结构。
2、不同浓度 CSC 对 WI-38 细胞在 TGF-β1 诱导下向肌成纤维细胞分化的影响:通过
ELISA 法检测,与对照组相比,%CSC 组和 %CSC 组α-SMA 含量无显著增高,
差异无统计学意义(P>),中间浓度 CSC 组α-SMA 含量显著高于对照组,差异有统
计学意义,且 CSC浓度越高α-SMA 含量越高,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<)
万方数据
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3、不同浓度 CSC 对 WI-38 细胞增殖的影响:通过 MTT 比色法检测,CSC 对体外培养
的 WI-38 细胞增殖的抑制作用较强,这种作用表现出一定的剂量和时间依赖性。相同浓
度香烟烟雾冷凝物不同时间(1-7d)作用后,随作用时间延长其抑制率增大,差异有统
计学意义(P<)。相同时间不同浓度(0% CSC、5%CSC、%CSC、10%CSC)作用
后,随浓度增高其抑制率增大,差异有统计学意义(P<)。
结论:
1、香烟烟雾冷凝物可抑制肺成纤维细胞的增殖;
2、浓度为 %的香烟烟雾冷凝物可能是促进肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化的最
佳浓度。
关键词:香烟烟雾冷凝物,肺成纤维细胞,转化生长因子β1,肌成纤维细胞,α-平滑肌肌
动蛋白
万方数据
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Effects of cigarette smoke condensate on the differentiation from
lung fibroblasts to myofibroblasts
Abstract
Objective: Cigarette smoke contains many harmful chemicals. It is one of the major causes of
various diseases. It is also recognized as one of the major risk factor of pulmonary interstitial
diseases. Possible molecular mechanism of cigarette smoke-involved interstitial lung diseases
is unclear, and there is no effective clin