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770-实验九硫***酸***比色法测定血清***亚铁嗪比色法测定
实验九硫***酸***比色法测定血清***
亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力【目的要求】 1、? 掌握硫***酸***比色法测定血清***化物的原理。 2、掌握亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力原理。【实验原理】血清***化物的***离子与未解离的硫***酸***溶液混合时,***离子首先与***结合形成难以解离的***化***,并释放相应的硫***酸离子,此离子与试剂中的铁离子结合,生成红色的硫***酸铁,其色泽与***的含量呈正比。【实验操作】取试管4支加入物试剂空白管标准管测定空白管测定管血清 0. 1 ***标准液 空白试剂 显色应用液 混匀,置室温10min,以试剂空白管调零,在460nm波长处比色,分别读取各管的吸光度。【计算】***化物(mmol/L) (A测-A测定空白)/A标*100 【参考范围】血清***化物 96-108 mmol/L 脑脊液***化物 120-132 mmol/L 尿液***化物 170-250 mmol/L 【注意事项】 1、此法对其他卤族元素也防身同样的呈色反应。但在正常人血液中上述元素含量低,可忽略不计。 2、显色液的呈色强度与硫***酸***和******的含量有关。如呈色过强,线性范围在125mmol/L以下,增加******的用量;呈色太弱,增加硫***酸***的用量,使用前二者进行调整,使其色泽在460nm波长,10cm光径比色杯测定,。 3、本法校正曲线不经过原点,但***离子调控适当,在70-140mmol/L范围线性良好。 4、本法呈色温度应不低于20度,室温过低易产生浑浊,影响比色。 5、可用于自动生化分析仪。 6、每批标本测定,应同时测定正常和异常值得质控血清,所得值应该在允许误差范围内,否则应查找原因。【评价】线性范围 75-125mmol/L 显色稳定性 ,%,Hb达到5g/L,%,
β-/L时,%%。亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力【原理】血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物,在酸性介质中铁从复合物中解离出来,被还原成二价铁,在于亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物,与同样处理的铁标准液比较,求得血清铁含量。总铁结合力(TIBC)是指血清中的运铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到血清中,使之与未带铁的运铁蛋白结合,多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去,然后测定血清中总铁含量,即总铁结合力。【实验操作】1、血清铁测定取试管3支加入物空白管标准管测定管血清 铁标准液 去离子水 甘氨酸- 混匀,37度5min,于562nm波长处,以空白管调零,读取A测(血清空白) 亚铁嗪显色液 B 混匀, 37度5min,再次读取各管吸光度。 2、,179umol/LTIBC铁,充分混匀,放置室温10min,加入碳酸镁粉末20mg,在10min内振摇数次,3000r/min离心10min,取上清液操作。取试管3支加入物空白管标准管测定管血清 铁标准液 去离子水 甘氨酸- 混匀,于562nm波长处,以空白管调零,读取A测(血清空白) 亚铁嗪显色液 混匀,放置室温15min,再次读取各管吸光度。【计算】血清铁(umol/L) (A测-A测空白*0. 86 )/A标* TIBC (umol/L) (A测-A测空白*)/A标* 【参考范围】血清铁成年男性:11-30 umol/L 成年女性:9-27 umol/L TIBC 成年男性:50-77 umol/L 成年女性:54-77 umol/L 【注意事项】 1、实验用水必须经过去离子处理。 2、溶血标本对测定有影响 3、标准液呈色可稳定24h,学清呈色30min内稳定,然后颜色会增加,因此应在1h内比色完毕。 4、血清铁存在日内变异早上值最高,晚上值最低。 5、所用试剂要求纯度高,含铁量极微。* *