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荧光定量PCR原理及其应用.ppt

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荧光定量PCR的原理及其应用
蒋昌龙
荧光定量PCR
Outline
荧光定量PCR的原理
荧光定量PCR应用
PCR 反应过程
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Taq 酶
Primers
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反应组分
变性
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延伸
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Taq
Taq
5’
5’
重复
退火
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3’
5’
3’
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3’
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5’
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3’
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5’
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循环2
4个拷贝
循环3
8个拷贝
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Cycle #
Theoretical
Real Life
Log Target DNA
PCR反应模式
同一样品96复孔的实验结果
荧光定量PCR 原理
缺憾
无法对初始模板精确定量
无法实时监测扩增情况
跑胶繁琐、易污染
常规PCR 电泳鉴定
荧光定量PCR
在体系中引入荧光染料
实时检测
扩增阶段:
指数期
平台期
荧光定量PCR 原理
荧光定量PCR 原理
Threshold line
C(t) value
阈值:荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准
C(t)值:荧光信号到达阈值时所经过的扩增循环次数

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