猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立.pdf

猪巨细胞病毒����ü舛�縋�检测的建立王东方,拜廷阳��庵久�,闫若潜��悦骶�,李文山��匝├�,王淑娟��趺�制药有限公司产品。检测样品采自河南省部分猪场,诊断为临床疑似��感染后采集的�份病死猪巨细胞病毒��������.��是~类在自然界普遍存在而又有严格种属特异性的病毒,属�逭畈《狙强疲�轮矸⒉〉奈V砭尴赴�《�������������琍��,是一种条件性传染病。该病毒首次从英格兰分离,是继伪狂犬病毒之后发现的第�鲋眇逭畈《尽�】。患猪特征性临诊症状为食欲废绝,母猪繁殖障碍,表现为流产、死产、木乃伊胎、产弱仔等;仔猪有明显的眼炎、鼻炎和肺炎症状,生长发育不良,增重差。本病毒分布广泛,大多数常规条件下饲养的猪群均存在��感染,而且抗体阳性率都很高,但一般为亚临床型。自从��年��首次报道该病以来,在英国、日本、德国、美国和澳大利亚等地区猪群的血清抗体阳性率大于�%。在感染猪群中,血清抗体阳性率高达�%:近年来,猪群中��感染呈现上升趋势,且多与猪蓝耳病等混合感染,大大加剧患猪的病死率�】。在日本��年就有本病病理学方面的报道��K孀牌鞴芤浦布际醯姆⒄梗琍��魑V碓�病毒,对异种移植构成的潜在威胁也引起了相应重视�,����建立��的快速诊断对该病的早期诊断、防治及公共卫生等具有重要的意义。传统的病毒分离方法需进行体外细胞培养增殖并观察细胞病变,但由于��在体外增殖较困难,所需时间长,费时费力,难以推广应用。因此建立猪巨细胞病毒快速、敏感、定量、特异的诊断方法非常必要。迄今为至,尚无利用�—��煦驤��感染的相关报道。特对建立���.��觳饨�惺匝椋�现将结果报告如下。�牧嫌敕椒���主要试剂及仪器�����全自动核酸提取仪为美国������公司产品;����荧光定量��俏C拦��用生物技术公司产品;梯度��俏5鹿鶥�����静�罚环止夤舛燃��.���H毡镜郝晒�司产品;凝胶成像分析系统为美�鶤������公司产品。��厥帐约梁屑爸柿P×刻崛∈约梁�等均购自大连��生物工程有限公司;磁珠法核酸全自动提取试剂盒购自���生物科技公司;��.���载体购自�����荆���质粒、菌毒株及检测样品重组质粒��一�鯟�由河南省动物疫病预防控制中心实验室保存。猪圆环病毒������猪细小病毒���⒅砦笨袢�《���、高致病性猪蓝耳病病毒��狿���⒅砹辞蚓���由河南省动物疫病防控制中心实验室提供。�传代细胞源猪瘟���活疫苗毒株为广东永顺生物�.河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州���;��芸谑行笄莞牧颊荆�幽现芸冢�����.鹤壁市动物疫病预防控制中心,河南鹤壁,����摘要:建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的���荧光定量��椒ā8�軬���已登录的猪巨细胞��������琍����蛄猩杓坪铣商匾煨砸�锒院蚑���ü馓秸耄��呕�从μ跫����了猪巨细胞病毒的���荧光定量��觳夥椒���������現�狿����辛薋�狿�检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似��感染临床样品进行了应用检测。并与常规��椒ń�辛吮�对;对���检测结果为��阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测。成功建立了��的���方法,标准曲线的循环闽值���与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为���;检测灵敏度可达�奖矗�埃�浅9鍼�的��叮惶匾煨愿