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生物化学参考资料
一、解答题
P54-3
答:正确。因为此三肽处于等电点时,其解离基团所处的状态应是:C—末端是完全解离的COO-(pKa=),N—末端是基本未解离的NH2(pKa=),侧链是3个三分之一解离的ε-NH3(pKa=),因此pI>最大的pKa值()
2、生物大分子(蛋白质)的分离方法,如何分离?
答:分离蛋白质的各种方法主要是根据蛋白质在溶液中的以下性质:分子大小、溶解度、电荷、吸附性质、对其它分子的生物学亲和力等进行分离
1、盐析与有机溶剂沉淀:在蛋白质溶液中加入大量中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质从溶液中沉淀析出,称为盐析。盐析时,溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。2、电泳法:蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷,因此在电场中可以移动。电泳迁移率的大小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以及分子大小。3、透析法:利用透析袋膜的超滤性质,可将大分子物质与小分子物质分离开。4、层析法:利用混合物中各组分理化性质的差异,在相互接触的两相(固定相与流动相)之间的分布不同而进行分离。主要有离子交换层析,凝胶层析,吸附层析及亲和层析等,其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量。
3、磷酸戊糖的途径及意义,标记第六个碳原子,会出现在哪些糖里?
答:途径:分为氧化阶段和非氧化阶段(略)
意义:是细胞产生还原力的主要途径,是细胞内不同结构糖分子的重要来源,并为各种单糖的相互转变提供条件。
出现部位:葡萄糖-6-磷酸、6-磷酸葡萄糖酸-δ-内酯、6-磷酸葡萄糖酸、核***糖-5-磷酸、木***糖-5-磷酸、景天庚***糖-7-磷酸、果糖-6-磷酸。
4、PCR反应原理(原料和影响)
答:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性;②模板DNA与引物的退火(复性) ;③引物的延伸
PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即:
引物、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)
影响:1、PCR用于合成基因或基因探针;2、用于DNA的测序;3、逆转录与PCR偶联;4、产生和分析基因突变;5、重组PCR;6、未知序列的PCR扩增;7、基因组序列的比较研究;8、在临床医学和法医学中的应用
5、蛋白质沉淀的方法
答:1、盐析法:向蛋白质溶液中加入大量的中性盐使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀;2、有机溶剂沉淀法:加入一定量的极性有机溶剂引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加异性电荷间的相互作用,使蛋白质颗粒容易聚集沉淀;3、重金属盐析沉淀法:当溶液pH大于等电点时,蛋白质颗粒带负电与重金属离子形成不溶性盐而沉淀;4、生物碱试剂和某些酸沉淀法:当溶液pH小于等电点时,蛋白质颗粒带正电与试剂生成不溶性盐而沉淀;5、加热变性法:几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固。
6、Tm的影响因素
答: Tm是DNA热变性引起物化性质改变一半时的熔解温度,受离子强度、pH值、极性溶质等各种因素的影响。离子强度低,Tm值较低;离子强度高,Tm值较高
G+C%,G+C%越大,Tm值越大(相同长度的dsDNA)。
G/C分布,G/C分布越均匀,Tm值越大
如果DN***