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5.3 血红蛋白的提取和分离 导学案.doc


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选修1课时14 血红蛋白的提取和分离
、电泳法等分离生物大分子的基本原理。

:
根据蛋白质各种特性的差异分离不同种类的蛋白质,如分子的________、所带电荷的________、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。
:
(1)概念:也称做________,是根据________分离蛋白质的有效方法。
(2)
(3)分离原理:
分离物质[来源:学科网ZXXK]
通道
路程
速度
相对分子质量较大
凝胶外部
______
较快
相对分子质量较小
________
较长
_____
:
(1)组成:通常由1〜2种________溶解于水中配制而成。
(2)作用:抵制外界的酸和碱对________的影响而保持其稳定。
:
(1)概念:指________在电场的作用下发生________的过程。
(2)原理:电泳利用了待分离样品中各种分子________以及分子本身的________的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
(3)两种常用方法:________和聚丙烯酰***凝胶电泳。
:
(3)________(即样品的加入和洗脱):________。
(4)纯度鉴定:________________。
:
(1)凝胶色谱柱的制作。
①取长40 cm, cm的玻璃管,________。
②选择适合封堵玻璃管口的________,中间打孔,孔径大小要能够紧密插入0. 5 mL的移液管。
③将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴,将0. 5 mL的________头部切下5 cm长的一段,插入橡皮塞孔内,插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。
④将尼龙网覆盖在橡皮塞的凹穴上,再用________将橡皮塞上部包好,插到玻璃管的一端。
⑤在色谱柱下端用________头部作出口部位,连接一细的尼龙管;并用螺旋夹控制尼龙管的打开与关闭, 尼龙管的另一端放入收集器内。
⑥柱顶部的制作,在色谱柱的另一端插入安装了玻璃管的________。
(2)凝胶色谱柱的装填。
①材料:本实验使用的是________。
②方法:凝胶用________充分溶胀后,配成凝胶悬浮液,一次性缓慢倒入色谱柱内。
③注意事项。
;
,使凝胶装填均匀;
,防止其________________________________,降低分离效果;

④检验:如果红色区带均匀一致地移动,说明色谱柱制作成功。
(3)样品的加入与洗脱。
调整缓冲液面:与凝胶面平齐

滴加透析样品:用吸管将(1)mL透析后的样品加到色谱柱的________

样品渗入凝胶床:打开下端出口,使________

洗脱:打开下端出口,用________洗脱

收集:待________接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每5 mL收集一管,连续收集
课堂练****

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