cpg odn对尘螨过敏性哮喘小鼠免疫调节作用的影响-儿科学(呼吸)专业毕业论文.docx

温州医学院硕士学位论文
oD Optical density 吸光度
OVA 0valbumin 卵白蛋白
PBMC Peripheral blood mononuclear cell 外周血单个核细胞 PC provocative concen臼弧on 激发药物浓度 SABC Strepi Avidin-ple’【 TB TbluidiRe Blue 甲苯***蓝
TOF-p Transforming growth factor 转化生长因子-13
Thl cdl helperT cell 1 T辅助淋巴细胞1
n垃cell helperT cell 2 T辅助淋巴细胞2
2
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CpG ODN对尘螨过敏性哮喘小鼠免疫调节作用的影响
研究生:郭伟导师:李孟荣副研究员 李昌崇教授
黄敏副教授 王宗敏教授温州医学院附属育英儿童医院呼吸内科儿科研究室
中文摘要
目的:探讨CpO ODN对尘螨过敏性哮喘小鼠免疫调节作用的影响。(1)建立尘螨哮喘小鼠模型并观察模型T-bet与GATA。3蛋白的表达情况。(2)探讨 T-bet、GATA一3与Thl/Th2平衡、气道炎症形成和气道高反应性(√址取)
的关系;(3)研究CpG ODN对气道炎症、AHR和Thl/Th2平衡的调控作用及其对T-bet/GATA-3蛋白表达的影响。(4)观察吸入糖皮质激素对哮喘气道炎症及气道反应性的影响。
方法:雌性C57BL/6J小鼠30只,,每组6只:正常对照组(A组),模型组(B组),CwC ODN对照组(C组),CpG ODN治疗组(D组),布地奈德组(E组)。正常组用生理盐水,模型组用尘螨抗原/氢氧化铝(20pg/2mg)于dl、d10腹腔注射(.)致敏,d17开始激发,隔日一次,共7次。正常组用生理盐水滴鼻(.)激发,其余组用尘螨抗原激发,
cpG ODN治疗组每次致敏时,CpG ODN 20pg与尘螨抗原混合腹腔注射, 布地奈德组每次激发前1小时雾化布地奈德混悬液。末次激发后24小时检测小鼠气道反应性,处死小鼠用固相夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)
,对肺泡灌洗液(BALF)、、、IFN. Y、TGF—B 1的水平,肺组织作病理检测观察肺组织结构、EOS、肥大细胞颗粒、杯状细胞以及超微结构等(HE染色、AB-PAS染色、甲苯***蓝法、电镜、免疫组织化学),、[FN-Y、 1
的水平。
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结果:
(1)气道反应性结果:尘螨致敏和激发的小鼠(B组)PCI5Cdyn、PC25Raw、气道阻力增加程度(Ra、v%)和肺动态顺应性下降幅度(Cdyn%)均明显高于A组;D组、E组与B组比较气道高反应性下降,但仍高于A组; D组比C组有明显好转,差异有显著性意义(p<<)。(2)BALF中的炎症细胞:各组BALF中细胞总数、EOS绝对值、嗜酸细胞百分比(EOS%)的比较,B组显著高于A组(均为p<);D组、E 组显著低于B组(均为p<);C组显著高于D组(均为p<)。(3)肺组织病理改变:B组小鼠肺组织切片HE染色可见支气管和血管周围炎性细胞浸润,以淋巴细胞、EOS和中性粒细胞为主,支气管上皮多处断裂,并有基底膜增厚和平滑肌肥大增生等表现。,杯状细胞增生,甲苯***蓝法染色可见大量的肥大细胞及其颗粒。D组和E组的上述改变程度不一,明显比B组的改变轻。c组比D组的改变明显。A组则无上述表现。(4)肺组织超微结构:电镜下A组(正常对照组)显示正常的肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮细胞,支气管纤毛上皮细胞的纤毛排列整齐;B组肺泡隔明显增厚,炎症细胞增多,基底膜增厚,肺泡II型上皮细胞肿胀,部分脱落在肺泡中,出现板层小体及线粒体空泡变性现象,支气管上皮细胞纤毛排列稀疏或断裂。C组表现与B组接近。D组和E组肺泡II型上皮细胞板层小体空泡变性现象不明显,支气管上皮细胞纤毛排列尚接齐。(5)BALF中细胞因子:、(P<);D组、E组与B组比较明显降低(P<<),同时,D 组显著低于C组(P<);(P<)
;D组显著高于B组、C组和E组(P<);(P<0。01);D组与A组、B组、c组和E组比较显著增高(P<); 1的浓度