cx43基因对小鼠近端流出道隔心肌化过程的调控机制研究-儿科学专业毕业论文.docx

、*t%.流&道WJ≮M“琏a∞口&nⅧ日究 英镕缩略目￡*&日nl BⅣ田 bone ic proteins 骨形态形成蛋白
TUNEL terminal deoxylnucleotiayl transferase TdT介导的dUTP缺口
mediaed—dUTP nick end labeling 末端标记法
MLC2a myosin light chain 2a 心房肌球蛋白轻链2
MLC2v myosin light chain 2v 心室肌球蛋白轻链2
DMEM o’S Modified Eagle’S Medium DMEM
FBS fetal bovine serum 胎牛血清
AEC 3-amino--9-·ethyl-earbazole
DAB 3,3'-diaminobenzidine 3,3’.二氨基联苯***
}Ⅱ冲 horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶
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Cx43基因对小鼠近端流出道隔心肌化过程的调控机制研究
中文摘要
锥干部畸形是常见的复杂性先天性心脏病(先心病),是导致儿童死亡的主要原因之一。近端流出道对锥干部的发育起着至关重要的作用。近端流出道隔是指半月瓣水平及瓣下的流出道分隔,此隔起初是由心内膜嵴形成的一个问充质形式的垫组织。在心脏发育过程中,近端流出道隔的间质成分被心肌成分取代,此过程称为“心肌化”。心肌化过程是流出道发育过程中的一个重要事件,心肌化障碍可导致流出道的结构和功能异常,因此阐明流出道隔心肌化的形成过程将有助于进一步揭示流出道畸形的发病机制。一些参与或影响心肌化过程的可能的细胞和分子机制被相继提出,其中心脏神经嵴细胞、细胞凋亡和转化生长因子(transforming growth factor,TGF)B2逐渐引起人们的注意。近年来人们还发现间隙连接蛋白(Conecxin,Cx)43与胚胎心脏锥干部的发育密切相关。Cx43缺失和过表达模型均显示了右室流出道畸形和梗阻,并且心脏神经崤细胞可能参与了其发病机制。因此,本课题利用Cx43基因敲除(knockout,KO)小鼠模型,
旨在研究Cx43在心肌化过程中的作用及其可能的机制;进一步揭示Cx43KO小鼠锥干部畸形的发病机制。
第一部分正常小鼠心脏流出道隔的心肌化过程研究
研究目的
探讨心脏近端流出道隔心肌化过程的时空规律以及心脏神经嵴细胞、细胞凋
亡在这一过程中的可能作用。
材料与方法
成年2月龄C57/BL6小鼠交配,选用胎龄(embryonic day,E)(day, d)至出生后1d小鼠为研究对象。采用免疫组化法测定横纹肌肌动蛋白a—SCA (c【.eric Actin),(Activator protein一2a),凋亡相关分子Active Caspase一3的表达;采用TUNEL(terminal deoxylnucleotiayl transferase nick end labeling)法原位榆测细胞的凋亡程度。
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结果
,; 丌始,。整个心肌化过程呈现心肌从流出道隔由外向内的内向性生长趋势。
,从E14,5以后消失。
Caspase一3的检测均表明近端流出道隔的凋亡集中出现在
,凋亡细胞的分布与AP一2ct阳性细胞分布一致。小结
,。
。

有关。
-20【阳性细胞分布一致,提示心脏神经嵴细胞可能通过凋亡途径参与了心肌化过程。
第二部分Cx43基因剔除小鼠近端流出道隔心肌化过程及其调控机制研究
研究目的
本实验利用Cx43基因剔除小鼠模型,主要从近端流出道隔的心肌形成、神经嵴细胞发育及细胞凋亡几个方面入手,探讨流出道隔心肌化是否异常及可能的细胞与分子机制。
材料与方法
成年2月龄Cx43基因剔除杂合小鼠交配, C57/BL6小鼠作为研究对象,根据基因型分为Cx43基因剔除纯合子(Cx43一/-)、杂合子(Cx43+/一)及野生型(Cx43+/+),采