cxcr4下调对乳腺癌转移影响的初步研究-生物化学及分子生物学专业毕业论文.docx

天津医科大学硕士学位论文
筛选转染成功的细胞,进行克隆化,扩大培养。用流式细胞仪从蛋白质水平检测CXCR4表达率,用实时荧光定量PCR从转录水平检测CXCR4基因表达受抑制情况。
第二部分:选用MTT法绘制细胞的生长曲线和平板克隆形成实验对细胞的增殖能力进行观察;应用流式细胞术检测了细胞的早期凋亡情况;采用 Matrigel Invasion Chambers实验对细胞的迁移能力和侵袭力进行了衡量。最后,(,E—cad)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin—like growth factor-binding protein 5. IGFBP-5)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)和基质金属蛋白酶一2(Martix metalloproteinase--2,MMP-2)等与乳腺癌转移相关基因的表达情况。结果:
第一部分:
1成功地构建了四种能够表达siRNA的质粒pSlieneer neo/siRNA,通过限制型内切酶酶切图谱和测序分析,证实插入载体的核苷酸序列和设计完全符合。
2转染四种纯化后的质粒到T47D细胞中,经(3418筛选出了三种转染成功的细胞(T47D/siRNAl、T47D/siRNA3和T47D/siRNA4)。 3经流式细胞仪检测,%, T47D/siRNAl、T47D/siRNA3和T47D/%、%%。经统计学处理认为,亲本T47D细胞的 CXCR4表达率与三种转染后的细胞比较差异有显著性(P<),而三种细胞间的表达率比较差异无显著性(P>)。 4实时荧光定量PCR检测结果是T47D/siRNAl,T47D/siRNA3和 T47D/%,%并U %。第二部分:
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天津医科大学硕上学位论文
1细胞生长曲线显示,亲本T47D细胞的增殖能力明显强于三种转染后的 T47D细胞,而克隆形成实验则显示亲本T47D细胞的克隆形成能力与三种转染后的T47D细胞比较差异无显著性(P>)。 2早期凋亡检测显示,四种细胞均未发现凋亡现象。
3 Matrigel Invasion Chamber实验中,, 。
4在转染组细胞中,E-cad的表达有上升的趋势,IGFBP一5的表达有下降的趋势,FN和MMP一2的表达变化未定。
结论:
I课题组自行设计的siRNA能够显著地封闭乳腺癌细胞T47D表面CXCR4 的表达。
2 CXCR4在乳腺癌细胞表面表达的下调对细胞增殖能力和凋亡没有显著的影响。
3转染组细胞的侵袭能力与未转染组比较明显减弱。
4 CXCR4下调引起的E·cad和IGFBP一5的改变可能影响癌细胞的侵袭力。
关键词:乳腺癌: CXCR4;;小干扰RNA;转移
天津医科大学硕上学位论文
ABSTRACT
Background&0bjective
Morbidity and mortality in cancer are mainly determined an-specific metastasis and the failure of chemotherapeutic drugs to selectively kill cancer cells at the sites of is a non—random process,and each cancer type has its own preferred sites of instance,breast cancer cells preferentially metastasize to the regional lymph nodes,lungs,liver'and bone. Prostate cancers usually metastasize to there has been considerable progress in identifying genes that promote the metastasis of cancer cells,little is known about the genes that enable cancer cells to seed,survive,and proliferate at sites of m