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gsh2基因沉默对胰腺癌sw1990细胞的作用-内科学(消化系病)专业毕业论文.docx


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GSH2基因沉默对胰腺癌SWl990细胞的作用
摘 要
胰腺癌是致死率最高的肿瘤之一,五年生存率小于5%tI,21。美国在过去的5年内,因胰腺癌每年死亡的人数超过30000人【3'4J。传统治疗手段包括手术、放疗[5]、化疗【61等,疗效均有限[7’101。胰腺癌的早期预防、诊断、治疗十分重要,亟待对其发病及进展原因的分子生物学基础进行深入研究【111。
GS homeobox 2 fGSm)基因,同时也称作GSX2基因,是同源盒基因家族的一员,定位于染色体4q12,由304个氨基酸组成【12】。GSH2基因是同源盒基因家族的一员,调控细胞的增殖、分化、凋亡、迁移、侵袭等功能。在胚胎神经发育及神经胶质瘤形成中【l31,GSH2协同SHH信号通路参与上述过程说明两者联系密切相关, SHH通路在胰腺癌的发生发展中起重要作用[14-161,而GSH2在胰腺癌中的作用未见报道。
本实验检测胰腺癌组织中GSH2基因的表达情况。通过RNA干扰技术【1 7】靶向沉默GSH2基因,检测对胰腺癌SWl990细胞的增殖、迁移、侵袭等功能,吉西他滨敏感性‘6】及HH信号通路通路关键分子SHH、GLll的影响【14-16]。通过Co—Ip[18-20] 技术检测在SWl990细胞中GSH2同SHH及GLll的相互作用。
第一部分GSH2基因在胰腺癌组织中的表达目的:检测胰腺癌组织中GSH2基因的表达情况。材料与方法:收集胰腺癌组织及癌旁正常组织各3例,通过HE染色、免疫组
织化学染色法检测GSH2的表达情况。以癌旁正常组织为对照,用RT-PCR法检测 GSH2基因在mRNA水平表达的差异,蛋白印迹法检测GSH2基因在蛋白水平表达的差异。
结果:本部分实验中免疫组化显示GSH2在癌组织中表达明显强于癌旁正常组
织,主要表达在胰腺癌导管细胞的细胞核部位。RT-PCR结果显示癌组织中GSH2 的相对表达量:-J:,癌旁组织GSH2相对表达量:,提示胰腺癌癌组织中GSH2的mRNA表达量较对照组高(t=,p<)。蛋白印迹法结果提示胰腺癌癌组织中GSH2的蛋白表达量较对照组高。
结论:GSH2基因在胰腺癌组织中高表达。
万方数据
第二军医大学硕士学位论文
第二部分 沉默GSI-12对胰腺癌SWl990细胞增殖、迁移、侵袭、吉西他滨敏感性及I-Ill信号通路关键分子Sttlt、GLll的影响
目的:沉默GSH2对胰腺癌SWl990细胞增殖、迁移、侵袭、吉西他滨敏感性
及HI-I信号通路关键分子SHH、GLll的影响。
材料与方法:用siRNA技术靶向沉默胰腺癌SWl990细胞的GSH2基因后,以转染NC—siRNA的细胞做对照,K-8法)、迁移(Transwell法)、侵袭(Invasion Chamber法)能力变化。并联合吉西他滨处理,检测处理后细胞增殖及凋亡(流式细胞仪)的变化。构建靶向沉默GSH2基因的shRNA载体质粒,并筛选沉默效果最佳者。用siRNA及shRNA沉默GSH2基因,分别以转染NC-siRNA 及转染空载质粒的细胞做对照。[21l及蛋白印迹法检测GSH2基因在
mRNA及蛋白水平的沉默效率,并检测HH信号通路关键分子SHH及GLll在
mRNA及蛋白水平的变化。结果:沉默GSH2基因后,,低于对照组
(;t=,P<);,低于对照组(+:t=。p<)+,低于对照组(-;t=,p<)。联合吉西他滨处理后,细胞在450nm的吸光值为 +,低于对照组(:t=,P<);细胞凋亡百分为
%,高于对照组(%;t=,p<)。成功构建shRNA
重组质粒并筛选出沉默效果最佳者。siRNA有效沉默GSH2后,RT-PCR检测GLll、 SHH 、,与对照组相比,Glil mRNA 相对表达量显著下调(-;t=,p<)而SHH mRNA表达量变化无统计学差异(-;t=,p=):WB结果显示Glil蛋白表达明显减少, 而SHH蛋白表达无明显改变。重组质粒GSH2一shRNA有效沉默GSH2后,RT-PCR 检测GLll、SHH 、

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  • 时间2018-06-25