ospsk4和ostpst在细菌性条斑病菌与水稻互作过程中的功能鉴定-植物病理学专业毕业论文.docx

15
15
-PCR分析 15
结果与分析- ~ 一· 16
OsPSK4结构与功能预测 16
OsPSK4超量表达和抑制表达片段的扩增 17
OsTPST结构与功能预测 18
OsTPST抑制表达片段的扩增 18
18
pCXUN—HA::OsPSK4水稻超量表达载体的构建 18
dsl301::OsPSK4水稻抑制表达载体的构建 19
dsl301::OsTPST水稻抑制表达载体的构建 20
~一一 一一 ~~一~ 21
pCXUNHA::OsPSK4转基因To代阳性株系对水稻条斑病菌RSl05更加感病--21
pCXUNHA::OsPSK4转基因To代株系的PCR阳性检测 21
pCXUNHA::OsPSK4转基因To阳性株系接种后表型鉴定 22
pCXUNHA::OsPSK4转基因T1代阳性株系对水稻条斑病菌RSl05更感病 23
pCXUNHA::OsPSK4转基因Tl代株系的PCR阳性检测结果符合共分离-23
pCXUNHA::OsPSK4转基因Tl株系接种后病斑长度统计值 25
~ ~ 一 一-27
pCXUNHA::OsPSK4转基因Tl代株系细菌生长曲线 28
dsl301::伪删转基因To代株系对水稻条斑病菌RSl05更加抗病 29
dsl301::OsPSK4转基因T0代株系的PCR阳性检测 29
dsl301::伪删转基因T0代阳性株系接种后表型鉴定 30
~一 ~——一~ 一~ 一一-32
dsl301::OsTPST转基因To代株系对水稻条斑病菌RSl05更加抗病 32
dsl301::OsTPST转基因To代株系的PCR阳性检测一 32
dsl301::OsTPST转基因To阳性株系接种后表型鉴定 33
一一一一一 一 34
1荧光定量分析抗病相关基因表达水平 35
II
万方数据
3 7
psk-a信号途径可能是细菌性条斑病致病因子 3 7
3 8
3 9
PSK参与的抗病途径可能与SA抗病途径相互独立 3 9
3 9
41
OsPSK4负调控水稻对细菌性条斑病的抗性 41
OsTPST负调控水稻对细菌性条斑病的抗性 4l
psk-a可能通过与AvrRx01互作负调控水稻对细菌性条斑病的抗性 41
6结:语。 PSK参与的抗病途径有可能是崭新的途径——-- --—· —-——·——— -————-一-z1342
44
附录I· 50
附录Ⅱ 58
60
III
万方数据
山东农业大学硕士学位论文
中文摘要
由革兰氏阴性黄单胞杆菌水稻致病变种Xanthomonas orygae (Xoc)引起的水稻细菌性条斑病(简称水稻条斑病)是目前水稻生产上最主要的细菌性病害之一。与水稻白叶枯菌不同,水稻条斑菌在叶肉细胞间隙繁殖并致病,在水稻遗传种质中也尚未鉴定主效抗性基因,推测与病原菌中可能存在某些特异效应因子可抑制寄主的抗性反应相关。
本课题前期常清乐(2013)通过白叶枯菌PX099a和本生烟的互作激发过敏反应系统在PX099a中筛选条斑病菌RSl05的基因组文库,发现携带有条斑病特异效应分子avrRxol基因片段的克隆能抑制PX099a在烟草上的HR反应。并通过相关实验证明了决定avrRxol抑制子功能与无毒基因功能受不同结构域决定。同时,以avrRxol为诱饵蛋白,通过酵母双杂交技术从粳稻中花1 l eDNA文库中筛选到多个水稻互作蛋白。为研究avrRx01在水稻条斑菌中致病性功能,本研究对其中的一个AvrRxol互作蛋白的编码基因OsPSK4(,psk-tt前体蛋白)进行了转基因功能研究。分别
::OsPSK4和抑制表达载体
dsl301::伪删并通过农杆菌介导的遗传转化方法转化水稻品种中花11。结果发现超
量表达OsPSK4基因能够显著降低水稻对细菌性条斑病菌RSl