保幼激素耐受蛋白在大猿叶虫生殖和滞育中的功能研究-农业昆虫与害虫防治专业毕业论文.docx

华中农业大学2016届硕士研究生学位论文
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Met的RNAi实验 ..14
2。2。 14
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dsRNA的合成 16
dsRNA的纯化 16
dsRNA的注射 16
I矾Ai后的分子检测 ..17
..17
17
..1 8
3结果与分析 .18
JH对大猿叶虫卵巢发育和脂质积累的影响 ..1 8
3。 JH对卵巢发育的影响 1 8
JH对脂质积累的影响 18
’3 JH对垤基因转录的影响 21
22
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Met在大猿叶虫中的时间表达模式 25
Met基因dsRNA的合成 ..26
..27
27
.29
..31
31
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4结论与讨论 .36
36
JH对大猿叶虫卵巢发育和脂质累积的影响 36
Met基因的克隆和与序列分析 .36
Met在大猿叶虫生殖和滞育中的功能 .36
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37
37
Met可能并非JH的唯一受体 ..39
致谢 .50
II
万方数据
保幼激素耐受蛋白在大猿叶虫生殖和滞育中的功能研宄
摘要
保幼激素(Juvenile hormone,JH)可调控昆虫成虫繁殖,缺失JH会导致虫体生殖滞育,表明JH可能在昆虫生殖发育和成虫滞育中发挥着重要作用。目前 JH在昆虫生殖发育和成虫滞育中的作用机理尚不明确。大猿叶虫Colaphellus
bowringi Baly是一种兼性滞育的蔬菜害虫。在25℃下,长光照条件下诱导为注定滞育个体,短光照条件下诱导为注定非滞育个体,成虫羽化到进入滞育状态的4天取食期为滞育准备期。注定滞育个体在滞育准备期内卵巢未发育且无卵黄沉积,脂肪体发育良好,后期填充整个腹部;注定非滞育个体卵巢发育良好, 卵黄发生沉积,脂肪体稀疏。本研究以大猿叶虫为实验对象,采用IⅢAi技术探究保幼激素耐受蛋白(Methoprene。tolerent,Met)在大猿叶虫生殖和滞育中的功能。主要结果如下:
-I对大猿叶虫卵巢发育和脂质累积的影响
对大猿叶虫注定滞育个体注射15岭保幼激素类似物Methoprene后,虫体卵巢发育,发育程度与注定非滞育个体相似。相比对照组,Methoprene处理组
坛的表达水平上调,脂肪体内脂滴信号减弱,相对脂质含量降低。

通过从大猿叶虫转录组数据库中获得Met的序列信息,根据序列设计引物, 经克隆、测序以及拼接,获得Metl、Met2基因的全长序列,cDNA全长分别为 2045 bp、2044 bp。通过Expasy转录软件进行蛋白的功能结构域分析发现两种
Met仅N端20个氨基酸存在差异,推测两种Met基因功能可能类似。通过Met 的系统发育进化树发现两种Met同属一分支,且与赤拟谷盗Met亲缘性最高。
采用RNAi技术对大猿叶虫注定滞育个体干扰Met后外源施加Methoprene, 垤J和V92的相对表达均显著低于对照组。干扰大猿叶虫注定非滞育个体Met 后,虫体卵巢发育受抑制,类似于滞育虫体的发育状态;脂肪体内脂滴信号减
弱,相对脂质含量上升;相比对照组,脂肪体内Fas、Hsp23、Hsp27的表达水平显著上调,但Foxo、Hsp21的表达水平与对照组无显著差异。
本研究结果表明,JH通过Met诱导卵巢发育和堙转录促进生殖、抑制虫体脂肪体的累积和虫体抗逆性,从而抑制滞育的发生。研究结果为JH信号途径机制的进一步解析提供线索与依据。
关键词:大猿叶虫;保幼激素;(Met);基因克隆;RNAi
万方数据
ABSTRACT
Juvenile hormone(JH)Call promotes reproduction,and the absenc