丙戊酸钠通过对smad4的双重作用抑制前列腺癌上皮间质转化的机制-外科学（泌尿外科）专业毕业论文.docx

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In缸oduction ··o
Material and Methods 8
1 Materials 萏
Cell lilles .萏
Ⅱ】a xenograRs ..8
ReageI】t and Collsumables .8
Ins灯uments . 8
2 Metllods . 9
PreperIaltion ofthe solutiOn . 9
Cell cult眦 . .1 0
Western bbtCing assay 1 O
Rt-PCR assav .1l
Imm咖ohistocheIllistry assay .12
P1asmids and tmns凳ction 12
Establish腿nt ofprostate carcinolI】a xenograRs ..12
Statistical processiIlg ..1 3
Results . .13
l VPA i1111mits the EMT iIl PCa cells ..1 3 2 VPA reduces SMAD4 expression and i11creaSes SMAD4 mono—ubiquitination 14 3 VPA s印presses tl】e gro叭h ofPCa xenogra缸..1 5
4 V1)A inhibitstl】e EMT a耐SMAD4 expression m viVo .1 6
5 VPA reguhtes the EMT via the s叩pression ofSMAD4 1 7
DiScussjon ..1 9
Review Anick ..22
Re凳rence 3 1
AcknowledgⅡ℃nt . .. 37
Publicatiolls . . . 38
万方数据
丙戊酸钠通过对SMD4的双重作用抑制前列腺癌上皮间质转化
的机制
专业: 外科学(泌尿外科)
硕士研究生: 兰晓鹏
导师: 夏庆华副教授
摘要研究背景
前列腺癌在美国是最常见的男性恶性肿瘤,在中国,其发病率也逐年飙升。一旦发病,死亡率也很高。前列腺癌细胞有较高转移特性,上皮间质转化(EMT) 在其中发挥重要作用,发生EMT的细胞会逐渐失去上皮细胞特性,形态学上更加细长,接近问质细胞形态,且获得间质细胞易于迁移的特性。EMT使得肿瘤细胞获得极大迁移特性,从而发生肿瘤转移,威胁患者生命。肿瘤细胞转移的分子机制以及如何抑制肿瘤转移一直是医学研究的重点课题,针对EMT,众多通路被认为参与其中,包括TGF—B、Notch、wnt以及ERK/MAPK等。TGF—B通路在其中发挥重要作用,TGF—B下游的SMAD4又是此通路信息传递的重要一环,SMAD4可将携带上游信息的R—SMADs转运至细胞核内,从而调控转录翻译等过程,对细胞活动产生影响。因此,进一步明确其中的调控机制是首要问题,之后再结合前期研究,结合药物的生物学机制,研究药物在其中可以发挥的作用及其机制,对未来前列腺癌的治疗有重要意义。
目的
前期研究已证实丙戊酸钠(VPA)可以抑制前列腺癌转移,并减低TGF—D通路中重要分子SMAD4的蛋白质水平。VPA对前列腺癌细胞发生上皮间质转化有何影响、其影响作用如何产生等还亟待认识。
方法
培养前列腺癌细胞、建立前列腺癌动物模型,经VPA处理后,检测其中EMT 标记物及SMAD4的表达水平,并与对照组比较。SMAD4蛋白分子的单泛素化水平也一同得到检测。应用质粒转染及shRNA技术调控细胞内SMAD4蛋白水平后,再检测EMT标记物水平及在VPA处理前后的变化,以验证VPA对SMAD4的作用是否
万方数据
影响VPA对EMT的作用。
结果
我们发现,在前列腺癌细胞及动物模型中,VPA都能明显升高E—cadherin 水平()并明显减低N—cadherin()及Vimentin()的表达水平。SMAD4的mRNA及蛋白水平在VPA处理下都减低(),我们同时发现,SMAD4的单泛素化水平在VPA处理后明显升高()。敲除SMAD4可以明显升高E—cadherin表达水平,但SMAD4的过表达却能消除VPA对EMT的抑制作用,表明VPA对EMT的调控需要通过其对SAMD4的作用来实现。
结论
VPA通过减低SMAD4表达水平并升高其单泛素化水平来抑制前列腺癌EM