丙戊酸通过干扰dna损伤修复通路抑制肿瘤细胞生长分子机制的研究-劳动卫生与环境卫生学专业毕业论文.docx

INDEX
Chinese abstract . 1
English abstract. .......... . ... . ....... ...... ...............5 Abbreviation .1 0
Introduction . .. ........................,...........1 1 Materials and Methods........... .. .... ... . .1 8 Results ........................ . ........ .. . .. .. . . . .. . ....30
Discussion. ..................... ......... . ... .....................42 Conclusions......... . ... ... ...... .................... .......... .................49 References .......................... ............ .. .50 Acknowledgements.......。.... 。.. .。....。。。。。..。。。。。...。.....。。。。. 。..。...58
List ofpublished papers ........ . . ............ . .........59
万方数据
山东大学硕士学位论文
丙戊酸通过干扰DNA损伤修复通路抑制肿瘤细胞生长分子机制的研究
研究生罗月导师凤志慧教授中文摘要
目的
乳腺癌作为一种女性常见的恶性肿瘤,已成为世界妇女健康的共同威胁。化学药物一直是临床肿瘤的主要治疗方法,但化疗药物自身的副作用以及长期应用后肿瘤细胞的抗药性使其临床应用受到了极大地限制。因此,临床上迫切需要一种新型的抗肿瘤药物或更有效的治疗策略用于肿瘤患者的治疗。
近些年来,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi) 被广泛的研究,并已经作为一种新型的抗肿瘤细胞生长药物进入临床试验研究阶段。我们和其他研究小组的实验结果都证明组蛋白去乙酰化酶抑制剂中一种代表性药物,丙戊酸(Valproic acid,VPA),可抑制乳腺癌细胞的生长,但其抗肿瘤
作用的机制目前还不十分清楚。此外,我们课题组既往研究还证明DNA复制蛋
白A2高度磷酸化(RPA2一p)一介导的同源重组(Homologous bination,HR) 通路可特异地参与羟基脲(hydroxyurea,HU)-诱导的DNA复制阻滞的修复过程。为此,本课题拟重点探讨VPA是否通过干扰RPA2-p介导的HR修复通路而造成DNA复制障碍,进而达到抑制肿瘤细胞生长的作用;更为重要的是,HU 也是临床}:常用的抗肿瘤药物,为指导VPA与HU联合用药治疗肿瘤患者提供有力的理论和实验依据。
方法
:单独HU组用2mM HU作用MCF7细胞18h;,换2mM ,换新鲜培养基继续培养14天, 计算克隆形成率。

万方数据
山东大学硕士学位论文
VPA作用MCF7细胞24h、2mM HU作用细胞18h或两药联合作用细胞,收集各组细胞制成单细胞悬液后进行彗星实验,观察细胞拖尾情况。
Rad51表达水平的检测
VPA作用MCF7细胞24h、2mM HU作用细胞18h或两药联合作用细胞。利用免疫荧光技术,将各组细胞固定后观察细胞核内yH2AX、 和Rad5l焦点形成情况;再利用免疫印迹实验,收集各实验组细胞的蛋白裂解液
检测RPA2-p和Rad51蛋白的表达水平。

首先对MCF7细胞进行转染,把带有标记绿色荧光蛋白的同源底物pDR—GFP 转染入细胞内进行筛选,。 VPA作用24或 48h、单独2mM HU作用1 8h或两药联合处理后,收集单细胞悬液,利用流式细胞术测定药物对细胞HR修复效率的影响。
结果