05-第七章mRNA和SSH.ppt

第七章目的基因的分离技术
第一节
mRNA差异显示技术( mRNA differential display reverse transcripion PCR,DDRT—PCR)
第二节
抑制消减杂交技术
(Suppression subtractive Hybridization)
第一节mRNA差异显示技术及其应用
一、mRNA差别显示技术概述
mRNA差异显示技术(mRNA差异显示PCR、差别显示反转录PCR)
( mRNA differential display reverse transcripion PCR,DDRT—PCR)
1992年,美国波斯顿 Dena Farber癌症研究所
、(乳腺癌细胞与正常乳腺细胞)
从一对细胞群体或一对基因型各自产生的约15000种mRNA中,有效地鉴定并分离出差别表达的基因。
水稻的抗盐基因、草莓的成熟基因、水稻蔗糖调节基因、拟南芥臭氧诱导基因。
一、mRNA差别显示技术概述
高等真核生物的基因:
看家基因/持家基因(house-keeping gene)
以其组成型表达模式维持细胞的基本代谢活动
发育调控基因/奢侈基因
(developmental regulated gene/luxury gene)
以其时空特异性表达模式完成个体的正常生长、发育与分化
在任一细胞表达的基因约占总数的15%,15000种不同的mRNA
一、mRNA差别显示技术概述
基因的差别表达(differential expression)
生物的发育与分化、细胞的周期变化、生物体对外界环境压力的反应、个体的衰老与死亡
哪些基因在何生长发育阶段以及在何种生理状态下表达,决定了整个生命过程。
比较同一类细胞在不同生长发育阶段的基因表达的差异,是克隆特异表达基因的方法。