实验十一 水体大肠杆菌抗原性检测.ppt

四、平板分离
每组制备伊红美兰平板2块
将初发酵管培养物分别划线接种于伊红美兰平板上(连续划线或者分区划线法),37℃培养18-24小时,观察结果。
阳性结果的标准:
、有金属光泽;
、不带或略带金属光泽;
,中心颜色较深。
大肠菌群能够分解乳糖产生大量的有机酸,在低pH值条件下,两种染料结合生成沉淀,可起产酸指示剂的作用。
六、复发酵确认
从伊红美蓝平板上将革兰氏阴性无芽孢的菌落接种于乳糖蛋白胨液体培养基中,每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1~2个,37度培养24小时,观察结果。

阳性结果的标准:发酵液变为黄色
杜氏小管内有气泡
五、革兰氏染色观察
将阳性结果的菌落取部分涂片,进行革兰氏染色,观察结果。
阳性结果的标准:革兰氏阴性,且无芽孢。
七、查表计数
根据三个梯度(即三个取水样的体积)每5管中出现阳性结果的管数,查阅
GB/T -2006 生活饮用水标准检验方法微生物指标
总大肠菌群MPN检索表,得到大肠菌群5次重复测试统计表的细菌最可能数,再乘以相应稀释倍数,即可换算为100mL水样中的大肠菌群数。
实验十二大肠杆菌和沙门氏菌的血清学检验
实验目的
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实验原理
抗体和抗血清:抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗血清(antiserum)是一种含有多克隆抗体的血清。
凝集反应:
颗粒性抗原(如细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒)与相应抗体结合,在一定条件下可形成凝集团块的现象。
在细菌总菌落数计数和大肠菌群计数基础上,运用血清学检验,能更好地将样品中的细菌进行鉴定。
实验步骤
一、菌悬液的制备
用Tip从伊红美兰平板上挑取1-2个带金属光泽的典型菌落,在100微升生理盐水的小管中打散均匀,标记为菌1。同样方法,做一管阴性菌落稀释液,标记为菌2
二、大肠杆菌、待测菌抗原性检测
事先将干净载玻片做上标记,取已稀释(10倍)的大肠杆菌抗血清和沙门氏菌抗血清,各20uL于载玻片上。然后,分别加入大肠杆菌和待测菌的菌悬液各20uL。将玻片放置于空培养皿中,于37℃保温10分钟
大
沙
大肠杆菌菌悬液
大肠杆菌菌悬液
大
沙
菌1悬液
菌2悬液
生理盐水
大
+ 空白
生理盐水
沙
—空白
温育15-20min后,检查是否有颗粒状沉淀,并对照阳性、阴性和空白,判断分析待测菌的种类