聚腺苷二磷酸核糖聚合酶.doc

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶.doc聚腺苷二磷酸核糖聚合酶
:王银,李云鸿滕鹏苗珍花,张琳娜,李博
【摘要】目的观察聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)对早产儿脑室周围白质软化(PVL)小鼠模型及体外培养的少突胶质前体细胞中的热休克蛋白60(HSP60)表达的调控作用。方法建立未成熟小鼠野生型(EM培养液中,37℃,5%CO2恒温箱培养。每3天换1次细胞液。2周后,利用摇床振荡法分离纯化OPC,分离的OPC种植到6孔板,培养液为含有N2, 10μg·mL-1PDGF 和 25μg·mL-1bFGF 的无血清DMEM溶液。第2天,用20 μM DPQ或Etopside分别处理OPC 1h,然后在细胞液中加入IFN-γ(1μg·mL-1),孵育30min,吸掉细胞液,加入细胞裂解液裂解细胞,收集,用Western-blot法检测细胞中HSP60的表达。
(one way ANOVA),P<。
2结果
-1在体内对HSP60表达的调控
采用免疫荧光标记法观察到,在PARP-1-/-实验组中,HSP60的荧光数量和强度明显高于野生型对照组(P<),见图1(封3)。
-1在体外对HSP60表达的调控
分别用PARP-1 抑制剂DPQ或激活剂Etopside处理,再用IFN-r激活的OPC,Western-blot结果显示经DPQ处理的OPC,HSP60的表达显著增加(P<),相反,经Etopside处理后,HSP60的表达被抑制了(P<),见图2。图2PARP-1抑制剂DPQ和激活剂Etopside对HSP60在OPC中表达的调控作用
PARP-1自1966年被发现以来,其在DNA损伤修复和维持基因组稳定性方面的重要作用引起广大学者的广泛关注。体内和体外的研究表明抑制PARP-1则可降低DNA的修复功能,增强放疗和化疗对肿瘤的治疗效果[11]。目前PARP-1抑制剂已经进入抗肿瘤药物I期临床研究,PARP-1有望成为肿瘤治疗的一个新靶点。
本研究的体内和体外的实验结果显示,在PVL动物模型中,当PARP-1基因缺失时,HSP60 的表达显著提高。当PARP-1被DPQ抑制时,HSP60的表达明显增强,而当PARP-1被Etopside激活后,HSP60的表达显著降低。这些结果表明,PARP-1对HSP60的基因表达具有负调控作用。因此,在PVL中,可以通过激活或抑制PARP-1来调控HSP60的表达。本研究对进一步认识 HSP60 在神经系统疾病中的作用,为预防和治疗 PVL 提供了一条新的思路。
【参考文献】
[1]Alard JE, Dueymes M, Youinou P, et al. Modulation of endothelial cell damages by anti-Hsp60 autoantibodies