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第5章植物细胞培养与次级代谢产物制备
植物细胞培养是指在离体条件下,将愈伤组织或其它易分散的组织置于液体培养基中进行振荡培养,得到分散成游离的悬浮细胞,通过继代培养增殖,获得大量细胞的一种技术。
植物细胞培养及特点
7/12/2018
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细胞培养与组织培养的区别
1979年国际组织培养协会专业术语委员会建议:
组织培养:从机体内取出组织或细胞,模拟机体内生理条件,在体外进行培养,使之生存或生长成组织。
细胞培养:动植物细胞在体外条件下的存活或生长,此时细胞不再形成组织。
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植物细胞培养的特点
与微生物相比
细胞大(30-100倍)
成团
不耐剪切
生长慢,周期长
易污染(培养基适于微生物生长)
光照影响较大,氧气、二氧化碳含量影响较大。
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植物细胞培养技术
培养基
植物单细胞分离与小规模培养
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单细胞分离方法
(一)机械法
具体做法:
将叶片轻轻研碎、过滤离心、收集净化
从未分化的疏松易碎的愈伤组织,通过摇床振荡获得分散的单细胞或小细胞团
优点:
细胞不受酶伤害;有利于进行细胞的生理和生化研究。
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(二)酶解法
酶对细胞壁有一定的软化作用,所以采用酶法时,必须加入甘露醇等渗透压保护剂;可通过加入硫酸葡聚糖钾来提高游离细胞的产量。(纤维素酶,果胶酶)
优点
可获得较多的叶肉游离细胞(但对禾本科植物叶片效果不好)。
单细胞分离方法
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细胞悬浮
过滤
与培养基混合
植板
培养
克隆愈
伤组织
(三) 愈伤组织诱导法
振荡、或加酶解。
单细胞分离方法
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植物单细胞小规模培养
培养方法
(一)看护培养
(二)饲养层培养
(三)液体浅层静止培养
(四)细胞同步化培养
(五)细胞平板培养
(六)微室培养
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(一)看护培养(nurse culture)
Muir(1953)首创此法获得烟草单细胞体系。
优点:简便易行,效果好。
缺点:不能在显微镜下追踪细胞分裂、生长过程
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(二)饲养层培养
Horsch等(1980)建立
培养皿
培养基
饲养细胞层
培养细胞
看护滤纸
转移滤纸
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