植物细胞骨架的光学显微观察.pptx

实验十
植物细胞骨架的光学显微观察
观察光学显微镜下细胞骨架的结构,了解显示植物细胞骨架的方法及其原理
一、实验目的
细胞骨架是指在细胞中支持和连接细胞各组分,以及与细胞运动有关的结构,它包括微管、中间纤维、微丝。当用适当浓度的Triton X-100处理时,可将细胞内大部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白质却仍被保存,经过固定和考马斯亮蓝R250染色,从而在光镜下观察到细胞骨架的网状结构。
二、实验原理
(一)器材:显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
(二)材料:洋葱鳞茎。
三、实验用品
:50mmol/L咪唑,50mmol/L kCl:, mmol/LMgCl2,lmmol/L EGTA(乙二醇双(a-氨基乙酸)醚四乙酸), EDTA,lmmol/L巯基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)。
磷酸缓冲液。
%Triton X-100,用M-缓冲液配。
%考马斯亮蓝R250,,冰乙酸7ml,。
%戊二醛,用6mmol/L磷酸缓冲液()配制。
%、7%、95%乙醇。
、正丁醇、二甲苯、树胶。
(三)试剂:
(一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小),使其下沉。
(二)吸去磷酸缓冲液,用1%Triton X-100处理20-30分钟。
(三)吸去Triton X-100,用M-缓冲液洗3次,每次10分钟。.
(四)3%-1小时(对照组开始处理)。
四、实验方法
(五),每次10分钟。
(六)%考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。
(七)用蒸馏水洗1-2次,材料置于载玻片上,加盖玻片,即可镜检。
(八)如作永久制片,可使样品顺序通过如下试剂:50%乙醇,70%乙醇,95%乙醇,95%乙醇和叔丁醇混合液(1:1),每次5-10分钟,或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二甲苯,每次5-10分钟。然后捞取样品,平展于载玻片上,中性树胶封固。