下载此文档

重庆大学考研分子生物学题库答案.doc


文档分类:研究生考试 | 页数:约18页 举报非法文档有奖
1/18
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/18 下载此文档
文档列表 文档介绍
高级分子生物学

答:(1)、基因表达系列分析技术
基因表达系列分析技术是一种以测序为基础定量分析全基因组表达模式的技术,能够直接读出任何一种类型细胞或组织的基因表达信息。其基本原理是根据理论上任何长度超过9-10个碱基的核苷酸片段可代表一种转录产物的特意序列,因此,选择特定的限制性内切酶分离转录产物中这些代表基因特异性的9-10个碱基的核苷酸序列并制成标签连接、克隆测序,根据其占总标签数的比例即可分析其对应编码基因的表达频率。
(2)、RNA选择性剪切机制
RNA的选择性剪切是指用不同的剪切方式(选择不同的剪切位点组合)从一个mRNA前体产生不同的mRNA剪切异构体的过程。一般将选择性剪切分为如下几类:平衡剪切、5’选择性剪切、3’选择性剪切,外显子遗漏,相互排斥性剪切。可以RT-PCR的方法研究一个基因是否存在选择性剪切。其步骤是:首先以cRNA两端特异性引物或来自不同外显子的引物序列在不同组织来源的RNA样品中进行扩增,观察PCR产物大小是否存在差异。如果发现差异,测序后可以分析出这种差异是否来自于选择性剪切。选择性剪切使一个基因翻译为多种蛋白质序列,是基因表达多样性的重要表现形式。
(3)、原位杂交技术
原位杂交(In Situ Hybridization,ISH)是用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。通常可以分为RNA原位杂交和染色体原位杂交两大类:1、RNA原位杂交用放射性或非放射性(如***、生物素等)标记的特异性探针与被固定的组织切片反应,若细胞中存在与探针互补的mRNA分子,两者杂交产生双链RNA,就可以通过检测放射性标记或经酶促免疫显色,对该基因的表达产物在细胞水平上作出定性定量分析;2、荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)技术首先对于寡核苷酸探针做特殊修饰和标记,然后用原位杂交法与靶染色体或DNA上特定的序列结合,再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体来确定该DNA序列在染色体的位置。FISH技术不需要放射性同位素,实验周期短,检测灵敏度高。
(4)定点突变技术
定点突变是重组DNA进化的基础,该方法通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列,常用于研究某个氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响,也可用于改造DNA调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等。但目前为止选择氨基酸突变的位点存在一定的盲目性。主要是采用两种PCR方法来实现:重叠延伸技术和大引物诱变法在基因序列中进行定点突变。
(5)RNAi技术
RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA,从而阻断体内靶基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。其过程一般为:在Dicer的参与下,细胞中的双链RNA首先被降解形成21-25个核苷酸的小片段双链RNA(siRNA),然后又siRNA中的反义链指导合成一种被称为RNA诱导的沉默复合体(RISC)的核蛋白体,再又RISC介导切割目的mRNA分子中与siRNA反义链互补的区域,从而实现干扰基因表达的功能。同时,siRNA可作为特殊引物,在依赖于RNA的RNA聚合酶的作用下,以目的mRNA为模板合成dsRNA,后者又可被降解为新的siRNA,重新进入上述循环。
(6)一些基本分子生物学手段
在启动子上游构建增强子、细菌培养时加入诱导物诱导产物生成等。

答:总体来说,真核生物基因组大,染色体数量多,且结构复杂,存在基因家族和断裂基因;原核生物基因组小,染色体数量少,结构简单,有重叠基因和操纵子结构,基因表达调控可以在复制、扩增、基因激活、转录、转录后、翻译和翻译后等多级水平上进行,但转录水平调控是主要的。如何实施调控,二者差距明显。真核生物,激素水平和发育阶段是基因表达调控的主要手段,而营养条件和环境因素的影响力大为下降。真核基因表达以正性调控为主导,基因的转录与染色质的结构变化相关,真核基因转录发生在细胞核(线粒体基因的转录在线粒体内),需对内含子精确剪接加工,翻译则多在胞浆,两个过程是分开的。基因表达调控的环节比原核生物更多。原核生物中,营养条件和环境因素对基因表达调控起举足轻重的作用,mRNA在形成过程中与核糖体混合在一起,如细菌。所以细菌的转录和翻译几乎发生在同一时间间隔内,转录和翻译相耦联。
详细分析其特点如下:
原核生物的基因表达调控特点

无论原核生物还是真核生物的基因调控主要是转录水平的,原核生物不同于真核生

重庆大学考研分子生物学题库答案 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
  • 页数18
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人miaoshen1985
  • 文件大小155 KB
  • 时间2018-07-14