肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响.pdf

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(4): 325–331
肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响
沈蓉蓉1 郑筱娇1 岑东1,2* 赵行1 滑世轩1 裴仁治3 吕建新1 涂植光4
(1温州医学院, 浙江省医学遗传学重点实验室, 温州 325027; 2浙江省鄞州疾病预防控制中心, 宁波 315100; 3浙江省鄞
州人民医院血液科, 宁波 315040; 4重庆医科大学医学检验系, 教育部“临床检验诊断学”重点实验室, 重庆 400016)
摘要探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后, 拮抗足叶乙甙(VP-
16)诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞: 未转染Raji细胞、空载体pVITRO2-mcs转染细胞和HGF基
因转染细胞, 分成正常对照组和经VP-16处理的药物组。采用Western blot法验证HGF蛋白的表达;
CCK-8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度; 通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙(AO)染色、苏
木精–伊红(HE)染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况, 并进行相关分析。结果显示: Western blot法
验证了HGF蛋白质的表达; CCK-8法显示100 μg/mL足叶乙甙可明显抑制Raji细胞增殖; 透射电镜
下可发现典型的凋亡细胞; 流式检测结果表明: 给药组与正常组相比, 三组细胞的凋亡率明显升高
(P<), 提示VP-16具有诱导细胞凋亡的作用; 但给药组间: HGF基因转染组凋亡率明显低于未转
染组(P<)和空载体pVITRO2-mcs转染组(P<), 提示HGF基因转染可明显抑制VP-16诱导的
Raji细胞的凋亡, AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP-16诱导的细胞凋亡效应。
关键词肝细胞生长因子; 基因转染; 凋亡
以往的肿瘤研究工作多注重细胞增生的失调, 现限公司, CCK-8试剂盒购自同仁株式会社, Annexin
在研究认为, 肿瘤发生往往同时伴有细胞增殖异常和细 V-FITC试剂盒、吖啶橙染色试剂盒、苏木素–伊红
胞凋亡异常, 细胞凋亡的减少在肿瘤发生发展中也起着(HE)染液等购自南京凯基生物科技发展有限公司。
重要作用。将细胞凋亡纳入肿瘤的发病机制研究, 可更 细胞株人淋巴瘤细胞系Raji细胞株购自
客观系统地阐明肿瘤发生的本质, 从而研究新的治疗手中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生
段与途径, 以有效提高恶性肿瘤的疗效, 降低死亡率。物学研究所细胞库, 载体pVITRO2-mcs转染Raji细胞
肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)作株和HGF基因重组表达载体pVITRO2-mcs-HGF转
为一种多功能的细胞因子, 可特异性增强HGF/c-Met 染Raji细胞株由本实验室构建[4], 兔抗人HGF多克隆
途径的信号转导, 在肿瘤细胞、组织及荷瘤个体中抗体购自Abcam公司, RPMI-1640培养液、澳洲胎牛
高度表达, 其表达水平与恶性肿瘤的发生发展呈正相血清等购自美国Gibco公司。
关[1-3]