五环三萜酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究.doc

五环三萜酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究.doc华中科技大学硕士学位论文
主要试剂配制
展开剂配制 1:石油醚:丙酮= 3:1
展开剂配制 2: 甲苯:乙酸乙酯:甲酸=4:1:
10%HCl 溶液:取 14ml 的 36%发烟盐酸在 50ml 容量瓶中定容得到。
实验方法
OA 衍生物的合成路线
乙酰化
COOH
COOH
O
HO
O
酰氯化酰胺化
Cl
O O
O
H
N
H
N
水解
O O
H3CO
O
O O
H3C
O
O CH3
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H
N
H
N
O
O
O
HO
HO
OH
图 1-1 合成路线
OA 衍生物的合成研究
[22,23]
OA 的乙酰化
(1)反应条件与步骤
称取 OA 放入 500ml 三颈烧瓶中,加入适量溶剂,搅拌至完全溶解。按
照一定 OA:醋酸酐的比例,缓慢滴加醋酸酐至三颈烧瓶内,继续搅拌混匀。10
分钟后加入吡啶,盖紧瓶盖,搅拌均匀后加入适量催化剂催化。反应过程中, TLC
检查反应完全(TLC 结果见图 1-2)。减压蒸干溶剂,加入适量蒸馏水,超声混悬,
用事先配好的 HCl 溶液调节 PH 值至一定范围,减压过滤,并用蒸馏水洗至中性,
放置于烘箱内,70℃下干燥过夜。
(2)化合物 1(3-O-acetate of OA)的纯化
将干燥后的初产物 倒入 100ml 三角烧瓶中,加入适量甲醇加热溶解,
进行重结晶。放置 6—8h 后,溶液中完全析出稳定的白色针状结晶,减压过滤,
并进行 TLC 鉴定,检验证明其为单一成分(TLC 鉴定结果见图 1-3)。常压干燥后,
获得化合物 1,称量重量,并计算产率。
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图 1-2 图 1-3
化合物 1(3-O-acetate of OA)的酰氯化
[24]
称取化合物 1 放入 500ml 三颈烧瓶,加入适量的溶剂,搅拌至完全溶
解。按照一定比例(化合物 1:酰氯化试剂),缓慢滴加酰氯化试剂于反应体系
中,盖紧瓶盖,反应开始进行。反应过程中,用 TLC 进行监控检测,由于酰氯结
构不稳定,因此需要进行简单的衍生化才能在 TLC 中稳定的检测出来(检测结果
见图 1-4,1-5)。搅拌反应 8h 后,反应基本完成。绝对无水状态下减压回收溶
剂和未反应完的酰氯化试剂,回收完成后,盖紧瓶口,备用。
图 1-4 图 1-5
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酰胺反应的进行
[25]
(1)反应条件与步骤
将赖氨酸甲酯倒入事先准备好的化合物 I 酰氯产物中,充分溶解以后再倒入
三颈烧瓶。在密闭的条件下,在特定的温度下水浴搅拌反应[26], 加入适量催化
剂催化。反应完毕后,将反应液倒入 150ml 的平底烧瓶,45℃下减压回收溶剂至
溶剂不再减少,加入适量蒸馏水,减压过滤,并不断用蒸馏水洗涤沉淀物,至续
滤液呈中性为止。将沉淀放入真空干燥箱中干燥。称量重量,得到 浅黄色
无味的粉末状物体,在光线下可见有晶体光泽。TLC 检测该物质为混合物(TLC
结果见图 1-6),需要进一步纯化。
(2)化合物 2 (LNOAERT)的纯化
方法一:硅胶层析法
称取 酰胺化得到的浅黄色粉末,加入适量丙酮于烧杯中充分溶解,然
后倒入事先装有 硅胶 G(200 目)的圆底烧瓶中,超声混匀。在 30℃下减
压旋蒸拌样,待溶剂被挥干后,将拌好的样研细,准备装样。
称取 45g 硅胶 G(200 目),干法装柱于直径 2cm,长度 25cm 的层析柱中。
垛实硅胶后,加入初始淋洗剂进行加压平衡。初始淋洗剂比例为:石油醚:丙酮
=10:1,平衡好层析柱后,备用。
干法上样,将待分样品上柱。继续用初始淋洗剂冲洗,控制淋洗剂流速在
50—60 滴/分。用 TLC 法进行实时监测(TLC 监测结果见图 1-7),最终得到白色
针状晶体,即化合物 2(LNOAERT)。称量重量,计算产率。
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图 1-6 图 1-7
方法二:溶解度差异法纯化化合物 2 (LNOAERT)
酰胺化反应复杂,从 TLC 鉴定结果来看,浅黄色粉末状物质的各成分之间
的极性相距较远,故考虑通过调节溶剂极性的方法来进行初步纯化。首先选取以
甲醇和蒸馏水为调节体系,对样品进行纯化。然而实验结果证明,甲醇和水的体
系,虽然有一定的纯化作用,但是由于调节后得到的沉淀粒径较小,普通的减压
抽滤难以获得,需要借助离心机的力量,故放弃甲醇和水的体系,以丙酮和水的
体系代替。该体系在获得初步纯化物方面简单易行,但是由