第4章 动物细胞培养制药工艺.ppt

第4章动物细胞培养制药工艺
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本章内容
制药动物细胞
动物细胞的生产特征
动物细胞培养技术
重组人红细胞生成素的生产工艺
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制药动物细胞
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一动物细胞的结构与功能动物细胞的结构与功能
细胞膜
细胞质
细胞核
没有细胞壁
亚细胞器
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动物细胞培养的代谢特征
葡萄糖和谷氨酰氨:能量和合成代谢的前体。
葡萄糖限制葡萄糖限制:通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿,反之通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿,反之亦然。
葡萄糖代谢:糖酵解为主,,生成丙酮酸和乳酸,乳酸分泌到胞外并在培养液中积累。另一条途径为TCA循环,彻底氧化产生CO2和水。一小部分为戊糖磷酸途径,生成生成4、5、7碳糖和NADPH。
中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。葡萄糖代谢旺盛,产生大量乳酸,对细胞有毒性。
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Gln代谢:脱氨、转氨等作用,合成其他必需和非必需氨基酸。
Gln氮源,Gln受限,增加其他氨基酸消耗以补偿。
离体动物细胞系,转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰胺在脱氨酶的催化下,脱氨产生氨,对细胞有毒性。
谷氨酰氨与丙酮酸发生转氨作用,生成丙氨酸,进入培养液并积累。
Gln能量:Glu转化为α-酮戊二酸,进入TCA循环。
流加葡萄糖或谷氨酰氨,控制整个代谢过程,避免有毒废物的积累。
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蛋白质糖基化与分泌表达
蛋白质合成场所:粗糙内质网上的核糖体
糖基化场所:内质网合成各种糖类,粗糙内质网腔内和高尔基体,加工修饰。
不同细胞系糖基化特征不同,选择适宜细胞系。
对于分泌型蛋白,分泌泡与细胞膜融合,释放到胞外,完成了蛋白质的分泌表达。
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二制药动物细胞的种类
目前用于制药的动物细胞有4类:
原代细胞系
二倍体细胞系
异倍体细胞系
融合的或重组的工程细胞系
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细胞系分类
来源:原代细胞,传代细胞。
寿命:有限细胞系,无限细胞系。
染色体数目:二倍体细胞系,异倍体细胞系。
获得方式:工程细胞系,癌变细胞系。
生长特性:贴壁依赖型,非贴壁依赖型细胞系。
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动物细胞的生产特征
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