人gtp结合蛋白rac1酶联免疫分析.doc

人GTP结合蛋白RAC1酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中GTP结合蛋白RAC1表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人GTP结合蛋白RAC1表达。用纯化的人GTP结合蛋白RAC1抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中GTP结合蛋白RAC1相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的GTP结合蛋白RAC1抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中人GTP结合蛋白RAC1的存在与否。
试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
6ml×1瓶
2
酶标试剂
6ml×1瓶
8
阳性对照
×1瓶
3
酶标包被板
12孔×8条
9
阴性对照
×1瓶
4
样品稀释液
6ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2张
6
显色剂B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求
,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后1