人p53p53酶联免疫分析试剂盒操作规则.doc

人P53(P53)酶联免疫分析试剂盒操作规则
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
50pg/ml-1600pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中P53(P53)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P53水平。用纯化的人P53抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入P53,再与HRP标记的P53抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P53呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人P53浓度。
试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
6ml×1瓶
2
酶标试剂
6ml×1瓶
8
标准品(3200pg/ml)
×1瓶
3
酶标包被板
12孔×8条
9
标准品稀释液
×1瓶
4
样品稀释液
6ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2张
6
显色剂B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求
1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1600pg/ml
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
800pg/ml
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
400pg/ml
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
200pg/ml
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
100pg/ml
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结: