人白三烯b4ltb4酶联免疫分析elisa.doc

人白三烯B4(LTB4)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人白三烯B4(LTB4)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白三烯B4(LTB4)水平。用纯化的人白三烯B4(LTB4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白三烯B4(LTB4),再与HRP 标记的白三烯B4(LTB4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白三烯B4(LTB4)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人白三烯B4(LTB4)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1个
1个
 
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品
×1瓶
×1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
×1瓶
×1瓶
2-8℃保存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8℃保存
样本处理及要求:
:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(-)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(
2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔