广西地方标准《牛支原体的检测 多重聚合酶链反应法》（征求意见稿）.doc

B 41
DB45
广西壮族自治区地方标准
DB 45/T XXXXX—2016
牛支原体的检测多重聚合酶链反应法
Detection of Mycoplasma bovis by Muti-polymerase chain reaction
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(本稿完成日期:2015年12月10日)
2016 - XX - XX发布
2016 - XX - XX实施
广西壮族自治区质量技术监督局发布
目次
前言 III
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
1
1
1
1
1
2
4 生物安全措施 2
5 防污染措施 2
6 试验材料 2
特异性引物 2
试剂 2
仪器设备及耗材 3
7 操作程序 3
待检样品处理 3
待检样品DNA提取 3
多重PCR检测 3
阳性及阴性对照 4
电泳 4
8 结果判定 4
附录A(规范性附录) 特异性引物序列及检测结果凝胶电泳图示 5
附录B(规范性附录) 试剂的配制 7
附录C(规范性附录) 溴化乙锭溶液及废弃溴化乙锭接触物的净化处理 9
前言
本标准按照 GB/T —2009 给出的规则起草。
请注意本标准的某些内容可能涉及专利,本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由广西壮族自治区水产畜牧兽医局提出并归口。
本标准起草单位:广西壮族自治区兽医研究所。
本标准主要起草人:李军、彭昊、杨威、潘艳、陈泽祥、陶立、冯世文、韦志锋、许力干、马春霞、兰美益、秦若甫、谢永平
牛支原体的检测多重聚合酶链反应法
范围
本标准规定了多重聚合酶链反应法(Multi-PCR)检测牛支原体和无乳支原体的术语和定义、生物安全措施、防污染措施、试剂与器材、操作程序、结果判定等。
本标准适用于牛支原体和无乳支原体的检测。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 19489 实验室生物安全通用要求
NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
牛支原体 mycoplasma bovis, ()
是感染并引起牛的肺炎、关节炎、乳房炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎、流产与不孕等多种疾病的致病性病原体。
无乳支原体 mycoplasma agalactiae, ()
是引起牛支原体性乳腺炎的病原体,可导致牛群的急性地方性乳腺炎,并随后演化为慢性乳腺炎。急性发作后可出现慢性乳腺炎或间断性急性暴发,呈亚临床感染。
聚合酶链式反应 polymerase chain reaction , PCR
又称特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术,简称PCR技术,是模板DNA在引物和4种脱氧核糖核苷酸及Mg2+存在的条件下,依赖于Taq DNA聚合酶的酶促反应。
多重聚合酶链反应 multip