[硕士论文]人胚胎干细胞作为组织工程化血管种子细胞的初步研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
人胚胎干细胞作为组织工程化血管种子细胞的初步研究
姓名:王彦
申请学位级别:博士
专业:外科学(整形外科)
指导教师:曹谊林
20050501
⑨英文缩略词表鮯上海第二医科大学博士学位论文’瓸
⋯名:伽作者签名:掌冢⋯蝴撇:勘学位论文独创性声明学位论文使用授权声明日期:≤蛰盘羔唬酰琭发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在立本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的蕊定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经文中作了明确说明并表示谢意。阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题日期:垫迹豪迹篺,
人胚胎干细胞作为组织工程化血管种子细胞的初步研究中文摘要此,我们首先对人胚胎干细胞的冻存方法进行了改进,尔后又将取生长良好的赴种冻存液冻存后,测定赴赴此蘸螅寺⌒纬陕史直鹞,ズ%,有显著性差为提高赴睦涠掣此章剩趆细胞的冻存过程中加入上海第二医科大学博士学位论文组织工程化血管是治疗血管性疾病最理想的血管替代物,但内皮细胞来源匮乏是制约其临床应用的关键问题。人胚胎干细胞具有全能性和无限增殖的能力,有望成为组织工程化血管种子细胞的新来源,然而其冷冻保存仍是目前亟待解决的问题之一。为其诱导分化为内皮细胞,以期为组织工程化血管提供新的种子细胞来源。方法与结果伺咛ジ上赴亩炒嫜芯不同冻存液对细胞的冻存效果比较配制殖煞莸亩炒嬉海珹:%培养液:%:%;治炯俏6存液、的冷冻复苏率和复苏后干细胞特性。结果显示,三种冻存液冷冻的异,@涠掣此蘸骽细胞仍维持干细胞各种特性,且核海藻糖在赴炒嬷械淖饔T逄牵鄄煜赴母此章屎透此蘸蟾上赴匦浴=峁斫当冷冻液和复苏液中都加入海藻糖时,赴此章士商岣叩.,比不加时提高了一倍多。而单纯在冷冻或复苏时目的型正常。
⑧以含维甲酸的培养液悬浮培养赴天后形成,移至平状细胞组成,随着管状结构的延伸,细胞逐渐减少,管壁变得光周围有上皮样细胞和圆形细胞出现,第炜J汲鱿钟稍残蜗赴上海第二医科大学博士学位论文添加海藻糖,复苏率介于两者之间。伺咛ジ上赴盏挤只Q9苣谄は赴白明胶包被的培养皿中贴壁生长。在畃。诱导下,第霦成的管状结构。管状结构自向周围呈辐射状生长,渐呈交叉网状。扫描电镜结果显示,管状结构的管壁最初由许多圆形细胞和扁滑。透射电镜结果显示,诱导出的管状结构由几个内皮样细胞围成,细胞呈扁平样,表面较光滑,相临细胞间有紧密连接,与正常毛细血管结构非常相似。经免疫荧光检测,一恃性表达。.闳∈笛榻峁屎焐ü猓Q粜浴结论赴捎煤%的冻存液冷冻保存,复苏后细胞仍维持胚胎干缅胞的各项特性,且核型正常。.?沙晒τ盏糷细胞分化为血管内皮细胞关键词:胚胎干细胞冷冻保存海藻糖诱导分化内皮细胞率。
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前言胚胎~—囊胚芫ê.欤踩肭的内细胞团。囊胚含有约如①减少血管通透性,调节组织与血液的物质交换,防止血浆成分和抗血小板机能,维持血液的流动性;③调节血管平滑肌功能,合内皮细胞在血管性疾病的治疗中也非常重要。动脉缺血性疾构建组织工程人工血管日益受到重视。组织工程化血管是由细胞材长而生长。为保证血管替代物的通畅率,内皮化是其关键,但目前内皮细胞来源较少。如何获取足够量的、健康有活力的内皮细胞是造成供区血管的损害、并且操作繁琐、增加患者的痛苦。随着人细胞株的建立和应用,探索胚胎干细胞源性内皮细胞作为组织琱裎豪丛从谠缙鱿赴獠阆赴谱萄悖涸鹋咛サ闹踩耄煞⒂膳咛的支持组织如胎盘等。内层细胞形成~个离心的细胞团,称内细胞上海第二医科大学博士学位论文血管内皮细胞是衬贴于心、血管腔面的单层扁平上皮。现代医学认识到它不仅仅是血液和组织的屏障,还具有重要的生理功能,和血液细胞无序地侵入;②抗血栓作用,平衡抗血液凝固纤溶系统成和分泌调节血管平滑肌舒张和收缩的相关因子;④抑制血管壁细胞的游走和增殖,⑤有多种受体存在,如脂蛋白受体、激素受体、药物受体等。病、外伤、感染等均可引起血管损伤,据统计全世界每年大约要实行例血管重建手术,但长期以来,缺乏理想的血管移植物严重制约了上述疾病的治疗效果。随着近年来组织工程学的发展,料复合物构建的血管替弋晶,在生物材料降艇后所形成的血管由活细胞所构成,具有