氨基酸分析实验报告.doc

生物化学实验报告
姓名:

学号:

专业年级:

组别:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
氨基酸的薄层层析
实验日期
2014-10-22
实验地点
第4实验室
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
掌握薄层层析法的一般原理。
掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
掌握如何根据移动速率(Rf值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。
二、实验原理
薄层层析
(如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分不同程度地分布在两相中,随着流动相从固定相上流过,不同组分以不同速度而最终被分离。
特点:分离效率高,能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质的分离纯化,也可用于大量物质的分离纯化和制备。
固定相:固定相是层析的一个基质。包括固体物质(如吸附剂,凝胶,离子交换剂等)和液体物质(如固定在硅胶或纤维素上的溶液),这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。
流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等,都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。
分类
(1)按两相所处状态,可分为液相层析和气相层析,前者以液体为流动相,后者以气体为流动相。
(2)按操作形式不同,可分为柱层析、薄层层析和纸层析。
(3)按层析的原理不同,可分为吸附层析、分配层析、凝胶层析、离子交换层析和亲和层析等。
今天要做的试验,根据原理属于吸附层析,根据操作形式又属于薄层层析,合到一起叫:吸附薄层层析。

一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来)

吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶:
硅胶:表达式为SiO2·XH2O。层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(-Si-OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.
硅胶吸附薄层层析的特点:
硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关。
硅醇基显较弱的酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离,碱性成分不能用它分离。
硅胶的活化温度通常为105℃-110℃,不能过高。
氨基酸与茚三***的显色反应
茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨基醛,与此同时,还原茚三***又与氨基茚三***缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值(rate of flow)来表示。
层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法:
实验材料
试剂
分析样品:氨基酸混合液
吸附剂:硅胶