实验9影响酶活性的因素.ppt

实验 9
影响酶促反应的因素
——温度、pH、激活剂及抑制剂
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实验目的


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实验原理
生物机体广泛存在各种不同功能的酶,催化不同的生物化学反应:
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖,用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物,并比较反应速度,从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应,可以定性研究影响酶活性的因素。
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酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般,温度每增高10℃,反应温度增加一倍,但同时,酶作为蛋白质,温度过高会发生变性逐渐失活,反应速度达到最大值时的温度称为某种酶的最适温度。
酶活力与环境酸碱度密切相关,某种酶只在一定pH范围才具有活力,酶活最高时的pH称为该酶的最适pH。

Cl-可以使淀粉酶的活力增加,是其激活剂;而Cu2+ 使淀粉酶的活力下降,是其抑制剂。
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实验器材
材料:唾液
试剂:% 蔗糖,%淀粉, 1% 淀粉, mol/L Na2HPO4, mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂,碘水,
用具:50 mL 烧杯 2 ,试管,玻璃漏斗,刻度移液管(2mL,5 mL) ,1000 uL移液器,37℃恒温水浴,冰浴,电炉,沸水浴, 6孔白瓷板,一次性吸管
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实验操作与现象
酶液的收集制备
漱口后,收集唾液> ,加入30倍去离子水稀释,混合。
配制酶促反应液时,其它组分均用刻度移液管进行;最后添加酶液时,可用移液器;显色反应,可用一次性吸管滴加试剂。
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实验操作与现象
酶的专一性
结论:唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。
无酶对照
底物对照
试管
1#
2#
3#
4#
备注
% 淀粉(mL)
2
-
2
-
% 蔗糖(mL)
-
2
-
2
唾液(mL)
-
-


水(mL)


-
-
现象
在白瓷盘中滴加2滴碘液,反应开始时和反应结束后分别取两滴反应液,观察显色反应(37 ℃反应10 分钟)。(此处可初步判断酶活力)
现象
本尼迪试剂(mL)




沸水浴(min)
5
5
5
5
现象
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二温度对酶活力的影响
试管
1#
2#
3#
4#
5#
备注
1% 淀粉(mL)





温度预处理(2 min)
37 ℃
0 ℃
沸水浴
0 ℃
沸水浴
唾液(mL)