脑通灵对大鼠脑缺血再灌注BaxmRNA表达变化的.doc

脑通灵对大鼠脑缺血再灌注BaxmRNA表达变化的.doc脑通灵对大鼠脑缺血再灌注BaxmRNA表达变化的
【摘要】目的:观察脑通灵对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法:应用动脉栓线法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用BaxmRNA原位杂交技术,观察阳性细胞,经图像分析,并测定脑组织超氧化物歧化酶活性(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:脑通灵治疗组与模型对照组比较,阳性细胞表达减弱,SOD活性高,MDA含量减低,组间比较差异有统计学意义(P<)。结论:脑通灵通过抑制促凋亡基因BaxmRNA和清除自由基,对脑缺血再灌注损伤有保护作用。
【关键词】基因;脑通灵;自由基;脑;缺血再灌注损伤;BaxmRNA;大鼠
【ABSTRACT】 Objective:To observe the protective effect of Naotongling on ischemia reperfusion injury in :The modified Bannister method ake the modle of focal cerebral ischemia reperfusion injury in rats to study the effect of Naotongling on BaxmRNA in cerebral cortex in the modle :Naotongling decreased average numerial and increased average gray value,there age induced by focal cerebral ischemia reperfusion.
【KEY DA、SOD测定试剂盒由南京建成生物研究所生产。
方法
模型制备及分组
健康雄性i[2]栓线法建立脑缺血再灌注大鼠模型,大鼠麻醉后,固定大鼠于手术台上,颈部正中切口,暴露右侧颈总动脉、右侧颈外动脉及其分支,在近颈总动脉分叉约3mm处剪一个小口,用动脉栓线插入颈内动脉约(18±)mm,遇轻微阻力后,结扎颈内动脉,再灌注时只需将栓线抽出。动物清醒后至少具备同侧Horner征,提尾时对侧前肢内收屈曲者为造模成功。缺血90min后,拔出栓线再灌注120min。脑通灵治疗组分别于梗塞前及再灌注前5min灌胃给药2mL;模型对照组腹腔注射等量生理盐水;正常对照组仅手术暴露血管。
标本采集和处理
各组均断头取脑,在脑的视交叉后和下丘脑后横断(冠状面)将脑分成前、中、后三部分,在前、中切面上,。
脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测量将大鼠断头取脑,去离子水冲静表面,取视交叉与脚间窝间切片约200~300mg,用SOD、MDA试剂盒和721分光光度计测定。
BaxmRNA原位杂交具体操作按说明书进行。
图像分析
利用北航提供的灰度及数密度分析软件,对原位杂交后切片进行计算机图像分析,所有切片均在同一放大倍数(×400)下分析,以胞质着色深度代表mRNA含量的变化,灰度值越小,说明其阳性细胞多(即mRNA含量高),反之灰度值大则说明其阳性细胞少(mRNA含量低)。
中药方