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PCR技术及其应用
周俊宜
基础医学院生化教研室
目录
PCR技术简史
PCR的原理
PCR的反应体系和方法
PCR的类型和应用
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
TAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
解旋酶
解链酶
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
TAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
GGAUCG
5‘
AUCGCG
5‘
引物酶
引物酶
RNA引物
RNA引物
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
TAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
GGAUCG
5‘
AUCGCG
5‘
TAGCGCTATCGCATCGACGCT
3’
ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG
3’
DNA
聚合酶
DNA
聚合酶
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
1971年,Khorana提出:经过DNA变性,与合适引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。
但由于测序和引物合成的困难,以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以,Khorana的设想被人们遗忘了……
PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
1985年,美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应(PCR)
基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制
最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR,由于该酶不耐热,使这一过程耗时,费力,且易出错
耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行,随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪
1993年,Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖
基因组DNA
获取特定DN***段
扩增特定DN***段