试论分光光度计检定过程中的注意事项.doc

试论分光光度计检定过程中的注意事项
摘要:在分光光度计的使用及检定中,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高检定准确度显得尤为重要。本文针对分光光度计的检定与使用应注意的事项进行论述。关键词:分光光度计;检定;注意事项
中图分类号:TB9 文献标识码:A

分光光度计是广泛应用于食品检验、生物制药、化工分析、冶金铸造、机械加工、医疗卫生、环境监测等方面质量控制及生产科研部门作为定性或定量分析的一种常用分析仪器,量大面广,尤其是化工、冶金行业生产过程控制及出厂检验必备的分析仪器,故分光光度计的检定和正确使用就显得尤为重要。笔者根据修定后的规程并结合工作经验就分光光度计检定和使用中应注意的问题谈谈自己的意见和看法。
一、可见分光光度计的原理可见分光光度计是一种结构简洁、使用方便的单光束分光光度计,基于样品对单色光的选择吸收特性可用于对样品进行定性和定量分析。其原理是:当一束单色光照射待测物质的溶液时,当某一定频率(或波长)的可见光所具有的能量(hf)恰好与待测物质分子中的价电子的能级差相适应(即ΔE=E2-E1=hf)时,待测物将对该频率(波长)的可见光产生选择性的吸收。用可见分光光度计可以测量和记录其吸收程度(吸光度)。由于在一定条件下,吸光度A与待测物质的浓度C及吸收池长度l的乘积成正比,即A=KCL,所以,在测得吸光度 A后,可采用标准曲线法、比较法以及标准加入法等方法进行定量分析。
二、检定前对仪器波长的检查
可见分光光度计的波长准确度是很重要的;特别在比较仪器时,波长准确度显得更加重要。因为物质对不同波长的光吸收时,有不同的摩尔吸光系数。我们知道,分光光度计分析测量的原理是基于郎伯- 比尔定律,其数学表达式为: A=- lg(I/I0)=- lgT=klc 其中: A- 物质的吸光度 I0- 入射的单色光强度、 I- 透射的单色光强度 T- 物质的透射比 k- 物质的吸光系数 l- 被分析物质的光程 c- 物质浓度郎伯- 比尔定律适用的前提条件是单色光,从公式中可以看出如果光的波长发生变化,将直接影响吸光度及物质浓度的测量结果,由此可见光的波长示值误差在分光光度计检定与使用中的重要性。针对某些厂矿企业实验室环境条件差,磁场、震动、腐蚀性气体对仪器的影响且使用比较频繁,容易造成仪器出现故障的情况,为了提高工作质量和效率,在检定前,应首先粗略检查仪器的光路,如果没有大的问题,可进一步按规程进行检定,如果不符合要求,应先粗略调整光路后再进行检定,这样可提高工作效率,收到事半功倍的效果,具体的方法是: 将仪器波长置于580nm 处,狭缝置于2 nm处(如果是可见分光光度没有必要),打开试样室盖,用一张白纸插入参比光路或样品的光路中央,这时在白纸上应看到一个清晰明亮完整的长方形橙黄色光斑。在紫外区一样,应看到一个亮度稍暗的长方形橙黄色光斑,当手动波长向长波方面变动时,应看到光斑的颜色由黄变红,继之当手调波长向短波方面时,应看到光斑颜色由红变黄向紫色变化。如果仪器波长检测能如上所述顺利完成,则说明仪器光路基本正常,波长示值误差应在2nm 范围以内。三、要重视对比色皿成套性的检定在分光光度计的检定中,我们往往重视对仪器本身的检定,而容易忽视对仪器配套使用的比色皿成套性的检定,这也是造成仪器分析结果偏离或超差的一