华中农业大学同位素示踪技术讲课提纲六.ppt

第五章放射分析技术
一、同位素稀释法(Isotope dilution techniques)同位素分析法是1932年由Hevesy和R、Hobbie所创立,它是测定混合物中某一组份含量或放射性活度的有效方法。该方法是利用放射性(或稳定性)核素作“指示剂”,检测待测物质的含量。在动植物等生化分析中应用最为广泛。
优点:
1. 不必将所需测定的组份全部定量的分离出来,而只需分离出纯净待测物一部分,并测定其放射比强度(或原子百分超),即可算出待测物的含量。解决了“定量分析中定量分离和纯度的矛盾”。
2. 容易区分化学性质极为相似的元素混合物中的某一核素(或化合物)的存在及其含量。
3. 解决其它方法难以解决(例如含量特低)的间题。
4. 操作方法简便快速。(愈高级愈简单)。
同位素稀释法的种类
1、          正稀释法
2、          逆(反)稀释法
3、          亚化学计量稀释法
4、          衍生物同位素稀释法
5、          双同位素示踪法
6、          结合放射稀释法
……
原理:
当待测物的放射性标记物与待测物混合均匀时,因其化学性质相同,混合前后其放射性强度不变。
关键词:
放射性强度
比强度
(一)   正稀释法:(Direct dilution)
重量放射性比强度
待测物 WX O
加入标记物 WO SO
混合(稀释)物 WX+WO Sm
由上述原理得:SOWO=Sm(WX+WO)
即:WX=WO(SO/Sm-1)
若WO很小:WX=WO×SO/Sm
如果Wx也具有放射性,设为S1,则有:
重量放射性比强度
待测物 WX S1
加入标记物 WO SO
混合(稀释)物 WX+WO Sm
由上述原理得: S1W1+S0W0=Sm(WX+WO)
即:WX=WO(SO-Sm)/Sm-S1
(二)    反稀释法(Lnverse dilution)
重量级放射性比强度
待测物 WX SO
加入载体 WO O
混合物 WX+WO Sm
同理得:SOWX=Sm(Wx+So)
即:Wx=Wo×Sm/So-Sm
若Wo>>Wx:Wx=WO×Sm/So
说明:
在做体内示踪实验时,如药物(被标记)动力学等。由于代谢,药物及代谢产物都含有放射性,只测放射性不能代表药物浓度,量太小,他法无能力测量,使用反稀释法很好。
植物方面的一个例子见P80。
但是,正` 反稀释法都必需测得稀释后比强度Sm,因此需正确测量分离物重量,带来不方便。又产生下面改良的几个方法。
(三)  亚化学计量稀释法:
利用亚化学元素计量分离方法和同位素稀释法相结合,由WX=WO(SO/Sm-1),求出SO/Sm比值即可。因此分别测定分离出的稀释前、后的两份等量的放射性物质(纯净,但不必知道量)的放射性强度Ao/Am比值来代替So/S于是可得:
Wx=Wo(Ao/Am-1)
优点:
不必准确测定分离出的纯净化合物的重量,分析方法更简单、而灵敏度提高(),此法分析关键是分离出等量的纯净物
(稀释前后的)。常与电解技术结合。
例如:利用35SO42-作示踪剂和难溶化合物溶解度一定的亚化学[计量稀释法,可测定土壤提取液中微量的SO42-。