髓芯减压联合干细胞移植治疗股骨头坏死的初期临床报告.doc

髓芯减压联合干细胞移植治疗股骨头坏死的初期临床报告.doc安徽医科大学硕士学位论文
来源。1867 年,德国病理学家 Cohnheim 在研究伤口愈合过程时,首次提出骨髓中
存在 MSC。在实验中给动物静脉注射一种不溶性染料 analine,结果在动物损伤远
端的部位发现含有染料的细胞,这些细胞包括炎症细胞和成纤维细胞,后者与细
纤维的合成有关,并认为这些细胞来自骨髓。这是最早提出骨髓具有造血以外功
能的报道。1869 年,Goujon 发现自体红骨髓异位移植后具有成骨的作用,也证实
了这一点。 Friendenstein[4]等(1987)发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核
细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞,而且
这些细胞经过 20—30 个培养周期后,仍能保持其多向分化潜能。因此,骨髓中的
这种多能细胞,由于能够分化成为多种中胚层来源的间质细胞,而被称为间充质
干细胞。BMSCs 具有分化为骨、软骨、上皮等的多向分化潜能,并且取材方便,
分离获取容易,免疫原性弱[5],在治疗股骨头坏死研究中倍受青睐。Hernigou[6]首
先发现在股骨头坏死(Osteonecrosis of the Femoral Head, ONFH)患者体内,造血组
织和间质组织中的 MSCs 的活力降低,数量受抑制,并认为 ONFH 可能是一种骨
细胞或间质细胞疾病。证实 ONFH 患者骨坏死区附近的成骨细胞的塑型能力明显
下降,这一发现提示在坏死区注入 MSCs 可能会提高坏死区成骨细胞的塑型能力。
1997 年,Hernigou 首次报道用自体骨髓移植治疗 ONFH 取得良好疗效。2005 年,
Gangji 也报道,对 18 例 ARCOⅠ~Ⅱ期的 ONFH 患者进行为期 2 年半的前瞻性队
列研究,病例分为髓心减压组和髓心减压植入自体骨髓单核细胞组,研究发现后
者疗效明显好于前者,并提示骨髓单核细胞及 MSCs 可能对早期骨坏死有修复和
重塑作用。
2 临床资料和方法
一般资料:
本组选择 2008 年 6 月-2010 年 6 月的股骨头坏死病例 16 例,共 17 髋。根据
世界骨循环研究学会(ARCO)的国际骨坏死分期标准:其中 I 期 7 例,Ⅱ期 9 例,
长期使用激素史 5 例,长期酗酒史 9 例,原因不明者 2 例。1 例为双侧,15 例为
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单侧,其中男 11 例、女 5 例,年龄在 23~47 岁;患者都有不同程度的髋关节疼痛
和功能受限;患者经髋关节 X 射线片及 MRl 检查确诊。
方法:
髓芯减压术的同时进行自体干细胞移植。
骨髓问充质干细胞的分离与鉴定:
骨髓问充质干细胞的分离
自髂前上棘处行骨髓穿刺,用内含肝素钠 2ml 的 20ml 注射器抽取骨髓
180~200ml,采用密度梯度离心法,于超净工作台内将骨髓加于 Percoll ( g/ml)
细胞分离液(Pharmacia 公司产品,货号为 17-0891-01)面上,使用离心机(Sanyo
RC-12BP 6000i )2000 r/min 离心 30 min,仔细吸取血清与分离液之间交界面的云
雾状单核细胞层,生理盐水重悬,1800r/min 离心 30 min,重复漂洗,获得细胞悬
液,计数有核骨髓细胞数量达到 ×109/ml,革兰氏染色镜检确认无污染,即可进
行移植(见附图 1~8)。
图一:骨髓血采集
Fig1:collect the bone marrow blood
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图二:骨髓间充质干细胞分离
Fig 2:centrifugate the BMSCs
图三:骨髓间充质干细胞悬液
Fig 3:the Suspensions of the BMSCs
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骨髓问充质干细胞的鉴定
MSCs 形态呈纤维样,可形成均匀的集落。分析表明,分离的细胞群体表型单
一,细胞表面蛋白如 CD29、CD44、CD17、CD106、CD120A、SH2、SH3 等呈阳
性,而 CD14、CD34 和 CD45 造血谱系标记则呈阴性。
图四:骨髓间充质干细胞形态 X100
Fig 4:the morphology of the BMSCs x100
图五:骨髓间充质干细胞形态 X 400
Fig 5:the morphology of the BMSCs x400
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图六:骨髓间充质干细胞鉴定 CD29+
Fig 6:the identification of the BMSCs CD29+
图七:骨髓间充质干细胞鉴定 CD