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核酸化学
1、RNA功能的多样性:
1)、控制蛋白质的合成
2)、作用于RNA转录后加工和修饰
3)、基因表达与细胞功能的调节
4)、生物催化与其他细胞持家功能
5)、遗传信息的加工与进化
6)、染色体、核糖体、核酸等骨架构成成分
7)、信号识别与转导
2、核酸碱基的理化性质:
1)、弱碱性
2)、紫外吸收特性:260nm
3)、嘧啶与嘌呤具有疏水性
4)、嘧啶与嘌呤环上的N、***基和环外的氨基具有亲水性
3、卫星DNA:主要分布在染色体着丝粒部位,由非常短的串联多次重复DNA序列组成,因为它的低复杂性又称简单序列DNA,又因其不同寻常的核苷酸组成,常在浮力密度离心中从整个基因组DNA中分离成一个或多个“卫星”条带,故称卫星DNA。
4、小卫星DNA:一般位于端粒处,由高度重复序列组成的小基因簇。通常有两种形式。
5、微卫星DNA:重复单位序列最短,具高度多态性,在遗传上高度保守,可作为遗传标记。
6、DNA指纹:,但人的总DNA提取后用限制线内切酶切成不同的片段,然后以ANTRs中的特异序列为探针进行southern杂交,可发现阳性片段的大小各不相同,由于不同个体的这种串联重复的数目和位置各不相同,所以VNTRs的southern杂交带谱就具有高度的个体特异性,称其为DNA指纹,可作亲子鉴定。
7、稳定双螺旋结构的力:1)、碱基分子内能2)、氢键3)、离子键4)、碱基堆积力5)、疏水作用
8、增色效应:DNA变性后,它在260nm的吸光值会上升30%以上,这一现象称为增色效应。
9、DNA具有高度弹性的原因:
脱氧核糖和磷酸组成的骨架上的键可以自由的移动,随着热力学的变化,可使键弯曲、伸展或碱基分开,这就使具有同样碱基配对的DNA双螺旋可以采取另一些构象,DNA构象的这种差异称为多态性。
1)、脱氧核糖的五元环能折叠成各种构象
2)、组成磷酸脱氧核糖骨架的连续的键可以转动
3)、C1-N核糖键可以自由移动
10、DNA构型的生物学意义:
1)、沟(特别是大沟)的特征在遗传信息表达过程中起关键作用
2)、沟的宽窄及深浅影响调控蛋白对DNA信息的识别,三种构型的DNA处于动态转变之中。
3)、DNA二级结构的变化与高级结构的变化是相互关联的。这种变化在DNA复制与转录中具有重要的生物学意义。
11、回文结构:又称为反向重复序列,是一段能自我互补的序列,即同其互补链一样的序列,能形成发卡结构或十字形结构。
12、镜像重复:在同一DNA链上无互补序列,不能形成发卡或十字形结构。
13、测定细胞和组织切片中核酸位置的三种方法:
1)、对RNA或DNA具有专一性染色的方法:孚尔根染色法、荧光染料染色法、碱性染料染色法
2)、紫外照相法:260nm下具有强烈的紫外吸收,细胞在此下照相,则含有核酸的结构很容易辨认出来。
3)、经专一酶处理后染色
14、稀有修饰组分的意义:
1) DNA分子中的稀有组分常在基因信息的表达调控和保护中起作用。
2) RNA特别是tRNA中也富含稀有成分,在RNA的功能中起作用:
A、 tRNA中的许多稀有组分与维持特定的三级结构、密码识别与精确配对有关。
B、 与细胞增殖有关
C、 与稳定核酸的高级结构及酶的识别有关
D、 与细胞癌变有关
E、 与基因表达调控有关。
酶化学
单体酶:由一条肽链组成,一般不需要辅助因子。
寡聚酶:由两个或两个以上亚基组成的酶。大多是调节酶,多含偶数个亚基。
同工酶:指催化化学反应相同,蛋白质分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。
酶的比活力:每毫克酶蛋白中所含有的酶活力单位。
回收率:每次提纯后酶制剂的比活力/提取液总活力。
纯化倍数:每次提纯后酶制剂比活力/提取液比活力。
组成酶:是细胞从恒定速率和恒定数量生成的酶类,是细胞中天然存在的,其含量较稳定,一般不受外界条件的影响。
诱导酶:是细胞中进入特定的诱导底物后,被诱导生成的,其有无及含量的多少受外界条件的影响。
酸碱催化:由质子转移所致的催化作用为酸碱催化作用;由催化剂向反应物提供质子为酸催化,由催化剂从反应物中夺取质子为碱催化。
共价催化:在酶催化反应过程中,酶与底物以共价键结合成中间物过滤态以加速反应。即在催化时,亲核催化剂或亲电催化剂能分别放出点子或汲取电子,并作用于底物的缺电子反应中心或负电中心,迅速形成不稳定的共价键中间复合物,降低反应活化能,使反应加速。
酶的亲核标记:根据酶与底物能特异性结合的性质,设计合成一种含反应基因的底物类似物,作为活性部位的标定试剂,它能像底物一样进入酶的活性部位,并以其活泼的化学基团与酶的活性基团的某些特定基因共价结合,使酶失去活性。
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