第十二章 毛细管电泳法-2.ppt

第十二章高效毛细管电泳
High Performance Capillary Electrophoresis
基本概念
电泳:一个“自由”的带电粒子在一定介质中在电场作用下的迁移。
淌度, μep :表述物质电泳特性的参数,与粒子电荷、质量、半径、介质等有关。
电渗,μeo :
由于粘滞阻力的存在,离子的电泳会带动溶剂同向运动。正负离子当量数相同时,溶剂受到大小相等方向相反的作用力,因此通常观测不到溶剂的运动。若设法使某种离子不运动,则作用于溶剂的力便失去了平衡,溶剂发生单向流动,这种流动称电渗。
在不考虑相互作用的前提下,粒子在毛细管介质中的运动速度是泳流速度和渗流速度的矢量和。一般情况下,电渗流速度是电泳流速度的5-7倍,混合物中所有的组份随电渗流朝一个方向迁移。
式中 E:场强
μeo电渗淌度
μep电泳淌度
原理
电渗流方向:高电位低电位
正溶质离子所受的力:电场力+ 电渗力
负溶质离子所受的力:电场力电渗力
中性分子所受的力:电渗力
溶质迁移方向由电场力和电渗力的矢量和决定,一般来说,溶质迁移方向与电渗流同。
流出顺序:①正离子②中性粒子③负离子
高压
(+)

Θ

Θ

Θ

Θ

Θ

Θ

Θ

Θ
电渗流
(-)
地
柱效:N=(tR /W1/2)2 tR、W1/2取同一单位
通常采用石英毛细管柱,一般情况下,表面带负电荷。当其与溶液接触时,在溶液中产生了一种过剩的正电荷与上述的负电荷平衡。在电场作用下,这层正电荷向负极移动,带动溶剂裹着溶质分子一起移动。
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高效毛细管电泳仪器
装置图
清洗
记录
检测器
高压电源
毛细管
电解液
高压电源
0-30KV输出,恒压恒流,正负极性可调。Pt丝电极 
进样系统
A、重力(高度差)进样
B、负压进样
C、电渗法进样 
分离系统
毛细管:. 50m-75m,长30-100cm
检测系统
商品仪器:UV-VIS,加石英聚焦镜;激光荧光
实验室:质谱,电分析
 
清洗系统
一般用负压法,NaOH洗液,减少吸附
清洗对重现性影响重大
分类
常规区带电泳(CZE)
胶束电动毛细管色谱()
毛细管离子分析