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第7章吸光光度法
§7-1概述
吸光光度法:
一、吸光光度法的特点
(1)灵敏度高
(2)准确度高
目视比色法,5%-20%
吸光光度法,2%-5%,1%-2%
(3)应用广泛
(4)仪器简单,操作快速、简便
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二、光的基本性质
1、光是一种电磁波,具有波动性和微粒性
光的电磁波性质
λ 10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm cm 10cm 103 cm 105 cm
γ x 紫红微无
射射外外波线
线线光光电
波
可见光
可见光:λ=400-750nm
2
光的波粒二象性
光的折射
波动性λν光的衍射
光的偏振
光的干涉
粒子性 E 光电效应
E:光子的能量(J, 焦耳)
hc ν:光子的频率(Hz, 赫兹)
E = hν= λ:光子的波长(cm)
λ c:光速(×1010 -1)
h:Plank常数(×10-34 焦耳. 秒)
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2、光的色散与互补色光
400nm 750nm
单色光:具有同一波长的光
复合光:由不同波长的光组合而成的光
互补色光: 绿
黄绿
若两种不同颜色的单色光按一蓝绿
定的强度比例混合得到白光,那么黄
就称这两种单色光为互补色光,这
绿蓝白光橙
种现象称为光的互补。
蓝
红
紫
紫红
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三、物质对光的选择性吸收
M + hγ→ M *
1、物质对光的吸收具有选择性△E = hγ
2、物质的颜色与光的关系
光谱示意复合光表观现象示意
完全吸收
完全透过
吸收黄色光 5
3、吸收光谱——A-λ




A
A




400 440 480 520 560 600 440 460 480 500 520 540 560 580 600
λ/nm λ/nm
***黄吸收光谱
四、光吸收的基本定律
1、朗伯-比尔定律
当一束平行单色光垂直照射到均匀、非散射的介质(S、l or g)
时,一部分被吸收,一部分透过介质,一部分被器皿表面反射
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'
' I0 Ia
I0 = Ia + I t + I r I t
b
I r
I0 = Ia + I t
I'
(1)透光度 0 Ia
b
I t I r
T = (7-1)
I0
1706年,朗伯研究发现,A∝b
1852年,比尔研究发现,A∝c
(2)朗伯-比尔定律
I
A = lg 0 = Kbc (7-2)
I t
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A-吸光度
吸光物质的本性
λ入射
K-比例常数,与有关
温度
介质
它表示了物质对某波长光的吸收能力
朗伯-比尔定律的物理意义(P218)
当一束平行单色光垂直照射到均匀、非散射的吸光物质的溶液
时,溶液的吸光度与吸光物质的浓度及液层厚度成正比。
(3)A与T的关系
A=-lgT (7-3)
A∝c
一般测求( 含量)
T=10-Kbc A c or
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(4)吸光度的加和性
A总=A1+A2+···+An=K1bc1+K2bC2+ ···+ (7-4)
2、吸光光度分析的灵敏度
(1)吸光系数a
A=Kbc中,当b-cm,c--1时,K=a (--1)
A=abc
(2)摩尔吸光系数ε
b-cm,c--1时,K=ε(--1)
A=εbc (7-5)
Ε的物理意义:-1,液层厚度
为1cm时,在一定波长下,溶液的吸光度。反映了吸光物质
对光的吸收能力,反映用吸光光度法测定的灵敏度
一般ε≥104 灵敏ε<103不灵敏ε=106
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+-1的溶液,用双硫腙法测镉,
液层厚度为2cm,在波长λ为520nm处,测得的吸光度为
,计算ε。已知MCd=
解: 140×10−6
C = = ×10−6 −1
Cd
A
ε= = = ×104 − −1
bc 2××10−6
(3)桑德尔灵敏度(Sandell)S
定义:S