[优秀论文]中脑神经前体细胞诱导分化及Prepro-NTN基因克隆.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
中脑神经前体细胞诱导分化及Prepro-NTN基因克隆
姓名:孙秀
申请学位级别:博士
专业:神经病学
指导教师:陈生弟

细胞特性厂越鹕痵前途的治疗方式。∥、培养和特性口中文摘要鼠胚胎天的中脑神经前体细胞,中脑神经前体细胞呈神经前体细胞特征性标自我更新能力,在碳は略鲋逞杆佟5背啡、置于含血清的培养基和被胞。因此我们培养的中脑细胞有增殖、自我更新能力和多向分化潜能等神经前体第二部分中脑神经前体细胞的体外诱导分化为基本病理改变的中枢神经系统变性疾病,目前尚无满意的治疗手段。的病变明确、病损细胞单一、位置相对局限,且有较好的动物学模型观察,因此较适用于细胞移植和基因治疗。胚胎中脑细胞移植治疗晚期疗效较好,但胚胎中脑细胞的来源非常有限,移植治疗又会引起诸多伦理学问题,故胚胎细胞的移植治疗并非理想的治疗模式。自从在体外成功分离培养神经前体细胞后,中脑神经前体细胞的体外培养,分化和移植治疗研究倍受关注。此外,的基因治疗也是较有本课题拟研究中脑神经前体细胞的体外培养、分化及分化的可能机制,为的神经前体细胞移植治疗提供实验基础。。记免疫阳性,无分化细胞标记。细胞克隆实验证实中脑神经前体细胞具有覆多聚赖氨酸呐嘌竽冢心陨窬疤逑赴煞只缮窬:托切谓褐氏染色了解其分化情况。—痬可诱导中脑神经前体细胞分化成阳性神经元,增加分化的阳性琍是以黑质纹状体多巴胺能系统变性为的蛑瘟铺峁┗痬,—/珿痬干————————————————二竺衍驯だ疾轶美贾黧皿美脊■——一
——±兰共槔祭贾骼俭盟是对能神经元有营养、支持和保护作用的神经营养因子,能神经元存活和发言功能,这为的蛑瘟乒ぷ鞔蛳铝嘶//、是对基因表达有重要调控作用的转录因子。.细胞。А细胞数目及促进阳性细胞形态发育。赴跫嘌细胞条件培第三部分一蚨灾心院臀谱刺迳窬疤逑赴鸑基因的诱导表达,导表达作用。蚩捎盏贾心陨窬疤逑赴鸑目焖俦泶铮琁到高峰,小时后恢复至基线水平。而纹状体神经前体细胞的贗盏己笪廾飨员浠L崾綢胞向能神经元方向分化第四部分虻目寺〖捌涠陨窬赴挠Q饔胣,并克隆至载体中,经酶切及测序鉴定正确;再将—正确,用表达奶跫嘌碓嘌咛ブ心陨窬#允酒溆写俳养基分别和各自的细胞膜裂解碎片以及细胞因子.,珿琁养神经前体细胞,阳性细胞数目无明显增加,但形态更趋成熟。而纹状体神经前体细胞在上述分化培养基内无明显的阳性细胞分化。体外培养的中脑神经前体细胞为研究能神经元的发育和的移植治疗提供有效、可靠及充足的供体前体细胞向阳性细胞方向分化,但其诱导机制与欠裼泄厣胁磺逦1部分实验采用—和免疫荧光染色方法观察了中脑和纹状体神经前体细胞内偷鞍字实谋泶铩V心院臀谱刺迳窬疤逑赴泶偷鞍字剩心陨窬疤逑赴腘表达量多于纹状体神经前体细胞,提示胫心陨窬5姆⒂芮邢喙亍灾心院臀谱刺迳窬疤逑赴鸑的诱/饔胠小时后,泶镌黾樱小时后,泶锎赡芡ü齆的过度表达促进中脑神经前体细是治疗的潜在有效因子。本部分实验采用椒ɑ袢猲基因克隆至真核表达载体中,经H荆贑赴瞬间表达,经印迹分析,鉴定其和蛋白表达餐捎盏贾心陨窬采用—椒ㄑ芯縄和、一
【关键词】中脑神经前体细胞哟叫龆喟桶纺苌窬狪两鹕。、埽■’科啤衽苩话二≮
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—————————————————诶疾轶兰竺苎兰苎言是以黑质一纹状体多巴眩能神经系统进行性尝试用自体肾上腺髓质细胞,交感神经细胞,胚胎中脑细胞移植治疗帕金森病。其中胚胎中脑细胞移植治疗帕金森病的疗效较好神经前体细胞的体外分离和培养成功为帕金森病的治疗提供了新的途径。目前发现神经前体细胞不仪存在于发育的脑组织内,也存在于成熟的脑组织目前已有若干实验室在体外成功分离培养中脑神经前体细胞帕金森病’变性为基本病理改变的中枢神经系统变性疾病。目前临床上多采用药物进行对症性和保护性治疗,但对晚期病人疗效欠佳,因大部分多巴胺能神经元已死亡,残存的神经元无法代偿功能。帕金森病病理变化清晰、病变细胞单~、位置局限,且有较好的动物学模型观察,因此细胞移植治疗方法应运而生,自年代