植物组织培养学03.pptx

二)胚状体方式(somatic embryo) 指由培养细胞诱导分化出具胚芽、胚根、胚轴的胚状结构,进而长成完整植株。
由外植体经胚状体形成完整植株可分三个不同发育阶段:
1)外植体细胞脱分化。外植体发生细胞分裂,或进而形成愈伤组织。这一阶段同不定芽方式一样。
2)胚状体形成在植物有性生殖中,精于和卵子结合形成合子,合子进一步发育成胚。但在组织培养条件下胚状体的发育过程是:细胞经脱分化后,发生持续细胞分裂增殖,并依次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期,进而成为成熟的有机体。我们把由愈伤组织的类似薄壁组织细胞不经有性过程而直接产生类似胚的这一结构,称为胚状体。
3)胚状体再发育成完整植株在外观上,这种方式和不定芽均有光滑、圆形突起的形状。
由外植体经胚状体形成完整植株可分三个不同发育阶段:
1)外植体细胞脱分化。外植体发生细胞分裂,或进而形成愈伤组织。这一阶段同不定芽方式一样。
2)胚状体形成在植物有性生殖中,精于和卵子结合形成合子,合子进一步发育成胚。在组织培养条件下胚状体的发育过程类似于合子胚的发育:细胞经脱分化后,发生持续细胞分裂增殖,并依次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期,进而成为成熟的有机体。我们把由愈伤组织的类似薄壁组织细胞不经有性过程而直接产生类似胚的这一结构,称为胚状体。
3)胚状体再发育成完整植株在外观上,这种方式和不定芽均有光滑、圆形突起的形状。
胚状体与不定芽的区别
胚状体在组织学上具备以下和不定芽不同的三个特征:
①最根本的特征是具有两极性,即在发育的早期阶段,从其方向相反的两端分化出茎端和根端,而不定芽或不定根都为单向极性。
②胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系,而不定芽或不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系。
③胚状体的维管组织的分布是独立的“v”字形,而不定芽的维管组织无此现象。
胚状体也是植物组织培养形态发生最常见而重要的方式,它较不定芽方式有更多的优点:如胚状体产生伪数量比不定芽多;胚状体可制***工种子,便于运输和保存;胚状体的有性后代遗传性更接近母体植株。这些对组织培养应用于育种是十分有利而重要的。
胚状体与合子胚的比较
合子胚
胚状体
质量
萌发率高,质量好
萌发率低,质量差
来源
受精卵
体细胞
胚柄
有,明显
即使有也不明显
形态
固定,体积相对较小
复杂,常有两个以上的子叶体积相对较大
变异率
低
高
(三)影响体细胞胚胎发生的因素

(1)生长素类:
我们以离体培养条件下胡萝卜的体细胞胚胎发生的诱导过程来进行分析(教程P99),在离体条件下胡萝卜体细胞胚的发育是一个包括两个步骤的过程,每个步骤需要一种不同的培养基。愈伤组织的建立和增殖所需要的是一种含有生长素的培养(增殖培养基),通常所用的生长素是2,4-D,—1mg/L。在这样一种培养上,愈伤组织的若干部位分化形成分生细胞团,称作“胚性细胞团”。在增殖培养基上反复继代,胚性细胞团的数量不断增加,但并不出现成熟的胚。然而,如果把胚性细胞团转移到一种生长素含量很低或完全没有生长素的培养(成胚培养基)上,它们就能发育为成熟的胚。看来,在增殖培养基中生长素的存在,对于胚性细胞团后来在成胚培养基上发育为胚是必不可少的。边疆保存在无生长素培养基中的愈伤组织不能形成胚。在这个意义上,可把增殖培养基看成是体细胞胚胎发生的:诱导培养基:,而把每个胚性细胞团看成是一个无结构的胚。
(2)细胞分裂素类:
细胞分裂素对于体细胞胚胎发生的作用有相反的结论,既或促进也可抑制体细胞胚的发生,这主要取决于植物的种类及其基因型。一般而言,细胞分裂素对于促进体细胞胚的成熟有显著作用,特别有利于子叶的发育。另外有研究表明,不同的外植体对于细胞分裂素的需要可能具有不同的专一性,如在胡萝卜的研究中发现,虽然BAP和激动素对胚胎发生过程表现抑制作用,,而BA对胡萝卜则是促进其愈伤组织的增殖,但不形成胚性愈伤组织。
(3)赤霉素类:
赤霉素类能抑制体细胞胚胎发生,但对于许多植物而言,赤霉素对于体细胞胚胎的成熟与萌发有促进作用。
(4)脱落酸:
抑制剂特别是ABA,在体细胞胚胎发生过程中的作用正逐渐被提示出来,ABA是一种天然产生的生长调节剂,当把无抑制作用剂量(~1μM)的ABA用于荷兰芹属培养物时,可以允许胚成熟过程进行。但是其抑制异常增殖,包括不定胚的启动。另一方面抑制早熟萌发。

氮源的形态有还原态氮(NH4+)和氧化态氮(NO3—)两种。在以KNO3为唯一氮源(如White培养基)的培养上建立起来的愈伤组织,去掉生长素以后不能形成胚。然而是,若在培养基中加入少量