第二章高效液相色谱法 课件.ppt

第二章高效液相色谱法
一、高效液相色谱法
的特点
二、流程及主要部件
三、影响分离的因素
四、高效液相色谱法
的主要分离类型
2018/10/15
液相色谱仪(1)
2018/10/15
液相色谱仪(2)
2018/10/15
液相色谱仪(3)
2018/10/15
液相色谱仪(4)
2018/10/15
液相色谱仪(5)
2018/10/15
一、高效液相色谱法的特点
特点:高压、高效、高速
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
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(1)应用范围不同
气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析;而液相色谱适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析,大约占有机物的70 ~ 80%。
(2)由于液体的扩散性比气体的小105倍,因此,溶质在液相中的传质速率慢,而在气相色谱中气体的传质速率要快得多。
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(3)液相色谱能完成难度较高的分离工作
①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的,而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子,为提高选择性增加了一个因素。
②液相色谱固定相类型多,作为分析时选择余地大;而气相色谱并不可能的。
③液相色谱通常在室温下操作,较低的温度,一般有利于色谱分离条件的选择,而气相色谱一般都在较高温度下进行的。
(4)液相色谱中制备样品简单,回收样品也比较容易,而且回收是定量的,适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器,仪器比较复杂,价格昂贵。
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高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。
例如对氨基酸分离,用经典色谱法需用20多小时才能分离出20种氨基酸;而用高效液相色谱法,只需lh之内即可完成。
又如用25cm×-ODS(5μ)的柱,采用梯度洗脱,.
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