WESTERN BLOT操作步骤图.ppt

WESTERN BLOTTING过程图解
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图中绿色的是夹玻璃片的架子
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玻璃板对齐后放入架中,把两侧的夹子卡紧。要使短玻璃靠外,长玻璃靠内。
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然后垂直卡在架子上准备灌胶。操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶。图示两块玻璃板放在一个架子上。
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配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用10ml枪吸取5ml胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些,胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下,这样胶中才不会有气泡。加水液封时要很慢,否则胶会被冲变型。)
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当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
按前面方法配4%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。
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均匀插入梳子
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梳子已经插好。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小,从而使加样孔的上样体积减小,所以在浓缩胶凝固的过程中要经常在两边补胶。
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浓缩胶干后,用手拿住梳子的两边均匀用力,拔起梳子
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将玻璃板从夹子上取下,用水冲一下
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