色谱分析法第节高效毛细管电泳.ppt

第七章色谱分析法一、高效毛细管电泳基本原理二、仪器装置三、影响柱效的因素及改进方法四、主要特点和应用第九节高效毛细管电泳*高效毛细管电泳仪器(1)Date高效毛细管电泳仪器(2)Date高效毛细管电泳仪器(3)Date一、高效毛细管电泳基本原理在电解质溶液中,位于电场中的带电离子在电场力的作用下,以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象,称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同,迁移速率不同可实现分离。,柱较短,分离效率不高(远低于HPLC),温度影响大。高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进。:,;二是采用了高达数千伏的电压。毛细管的采用使产生的热量能够较快散发,大大减小了温度效应,使电场电压可以很高。电压升高,电场推动力大,又可进一步使柱径变小,柱长增加,高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱,理论塔板数高达几十万块/米,特殊柱子可以达到数百万。:带电离子在电场作用下的迁移,速度ν电泳电渗流现象:玻璃表面存在硅羟基,pH>3时,形成双电层,在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动,速度ν电渗流。,柱中出现:电泳现象和电渗流现象。带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流两种速度的矢量和。正离子:两种效应的运动方向一致,在负极最先流出;中性粒子无电泳现象,受电渗流影响,在阳离子后流出;阴离子:两种效应的运动方向相反,ν电渗流>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。(1)毛细管区带电泳(CZE)最普遍、最基本的一种分离模式。(2)毛细管凝胶电泳(CGE)将聚丙烯酰***在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性,类似分子筛的作用,试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。可分离测定蛋白质、DNA等。Date(3)毛细管胶束电动色谱()在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂,形成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下,胶束在柱中移动。由于电泳流和电渗流的方向相反,且ν电渗流>ν电泳,则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动,中性试样分子在胶束相和溶液(水相)两相间分配,疏水性强的组分与胶束结合的较牢,流出时间长。可用来分离中性物质,扩展了高效毛细管电泳的应用范围。Date