微生物实验问题与答案.doc

一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察
1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大?
答:油镜能减少光的折射,进而提高视野的亮度;通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。
2、数值口径的表达公式?
答案:=n ×sin α,n为介质折射率;α为光线最大入射角的半数。
3、显微镜数值口径与分辨力的关系?
答案:分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力,它与光的波长成反比,与数值口径成正比。
4、油镜的使用与普通物镜有何不同?
答案:油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂,如香柏油等才能使用,而普通物镜则不需要;油镜是由100×物镜与香柏油构成,而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。
5、使用油镜时应特别注意什么?
答案:上下调节镜头时应使用微螺旋,否则容易损坏镜头;应使油镜始终浸泡在香柏油中,否则就不是油镜;使用完毕后,必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹,否则会玷污油镜。
6、什么是物镜的同焦现象?它在显微镜观察中有什么意义?
答:在一般情况下,当物像在一种物镜中已清晰聚焦后,转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时,物像将保持基本准焦的状态,这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象,可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦,从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。
7、根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察
答:细菌用油镜,真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后,再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。
答:放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大,用放大40倍的物镜就可以看了,细菌小,要用放大1000倍的物镜看,感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。
二、微生物染色
1、单染色的原理是什么?
答案:主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。
2、单染色过程中,为什么干燥固定?
答案:因为通过干燥可以使菌体蛋白变性,细胞质凝固,进而可以使菌体紧密地附着于载玻片表面。
3、单染色过程中,为什么水洗时水流要缓慢地从载玻片上端流下?
答案:因为如果水流直接冲洗有菌部位,容易使菌体被冲洗掉。
4、为什么载玻片要完全干燥后,才能使用油镜?
答案:因为香柏油与水不相溶,容易造成光线发生折射或散射,一方面无法构成油镜,另一方面也会降低视野的亮度。
5、革兰氏染色的原理是什么?
答案:对于G+细菌来说,当用乙醇脱色时,由于肽聚糖含量高,网孔小,再加上脂量低,所以乙醇脱色后,进一步地缩小了网孔,结晶紫-碘复合物无法脱出,第二次用番红染色时无法着色,进而呈紫色;对于G-细菌来说,当用乙醇脱色时,由于肽聚糖含量低,网孔大,再加上脂量高,所以乙醇脱色后,进一步地扩大了网孔,结晶紫-碘复合物被脱出,第二次用番红染色时着色,进而呈红色。
6、革兰氏染色时,为什么要加碘液?
答案:碘可以与结晶紫染料形成较大的复合物,从而可以阻止结晶紫向细胞外渗透;另一方面也可以增加结晶紫与细胞质的亲和力。
7、革兰氏染色时,为什么要用酒精冲洗?
答案:加酒精是为了溶解细胞壁中的脂类和脱去细胞内的有机染料。
8、革兰氏染色时,为什么不能涂片太厚?
答案:涂片太厚,容易使菌体重叠,