鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素与TGF.doc

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGFβ1的影响
作者:韩琳秦建国任可陈志强许庆友作者单位:北京中医药大学基础医学院,北京 100029
【摘要】目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)、转化生长因子(TGF)Β1表达的影响。方法 SD大鼠采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法制备肾间质纤维化模型,将其随机分为鳖甲煎丸组、缬沙坦组与模型组,并设假手术组(分离输尿管后缝合腹部)。缬沙坦组、鳖甲煎丸组分别给予缬沙坦10 mg·kg-1·d-1、 g·kg-1·d-1灌胃,模型组和假手术组每日给予等容积的蒸馏水。所有动物于术后第14天断头处死,切取左肾,留取肾组织标本。采用免疫组化及RTPCR方法观察梗阻侧肾脏ADM、TGFΒ1在蛋白及基因水平的表达,放射免疫法测定ADM在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏ADM蛋白含量、蛋白表达及mRNA的表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量均高于模型组(P<);TGFΒ1的蛋白及mRNA的表达各治疗组明显低于模型组(P<),鳖甲煎丸组、缬沙坦组两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,下调TGFΒ1的表达,对肾脏起到保护作用。
【关键词】鳖甲煎丸,肾间质纤维化,肾上腺髓质素,转化生长因子
Β1
肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)是新发现的一种内源性血管活性肽,在心肾功能调节中发挥重要作用。最近研究发现ADM具有拮抗转化生长因子Β1(Transforming growth factorΒ1,TGFΒ1)的促纤维化作用而减轻肾小管间质的损伤〔1〕。大量动物实验显示,活血化瘀中药能抑制TGF的表达,对肾脏起到保护作用,但这种作用是否与其他血管活性肽的参与有关尚不清楚,为了证明其可能的作用机制,为临床用药提供理论和实验依据,本文采用单侧输尿管结扎方法制备肾间质纤维化模型,并给予活血化瘀、软坚散结的鳖甲煎丸,观察鳖甲煎丸对大鼠肾脏肾上腺髓质素及TGFΒ1表达的影响,探讨鳖甲煎丸拮抗肾间质纤维化可能的作用机制。
1 材料与方法
动物雌性SD大鼠40只,体重(180±10)g,清洁级,由河北医科大学动物中心提供。
药物与试剂鳖甲煎丸(杭州胡庆余堂制药厂生产),缬沙坦(诺华公司提供),大鼠ADM抗体(武汉博士德生物有限公司提供),TGFΒ1抗体(Santa Cruz 公司提供),ADM放免试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。
模型的建立实验过程中大鼠自由进食和饮水,分别置于代谢笼里取尿,检测尿蛋白和尿红细胞,结果均为阴性用于实验。将大鼠随机分为假手术组、模型组、鳖甲煎丸组、缬沙坦组,每组10只。大鼠给予10%水合***醛以30 mg/kg的剂量腹腔注射麻醉,腹部切开,暴露左侧肾脏,分离输尿管,于中上1/3处结扎并剪断,使左肾完全梗阻。假手术组分离输尿管后缝合腹部。缬沙坦组、鳖甲煎丸组于术前1 d分别给予缬沙坦10 mg
·kg-1·d-1、 g·kg-1·d-1灌胃,模型组和假手术组每日给予等容积的蒸馏水。所有动物于术后第14天断头处死,切取左肾,留取肾组织标本。按冠状位纵形剖