hxj血清清球蛋白分离新.ppt

2009年秋季学期
1
内容
实验目的
1
实验原理
2
实验材料
3
实验过程
4
5
注意事项
2009年秋季学期
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实验目的
掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法
掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法
了解柱层析技术
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实验原理
蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别,可分离纯化各种蛋白质。
2009年秋季学期
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蛋白质的理化性质与常用的分离纯化方法
蛋白质的理化性质
常用的纯化方法
分子质量
透析、超滤
凝胶层析★
离心
溶解度
调整pH
调整离子强度★
降低介电常数
电荷
电泳★
等电聚焦
离子交换层析★
特异结合部位
亲和层析
其他性质
吸附层析
液相层析
气相层析
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球蛋白
1
2


等电点




~
相对分子量(×104)

20
30
9~15
~30
含量(%)
57~67
2~5
4~9
~12
12~20
血清蛋白的等电点、平均分子量及正常含量
清蛋白 A
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1. 粗提(盐析法)
由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样。
调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。
血清清蛋白
球蛋白
半饱和硫酸铵
清蛋白不沉淀,上清
球蛋白沉淀,蒸馏水溶解
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2. 脱盐(凝胶层析)
盐析分离的蛋白质溶液中含有大量无机盐,必须先脱盐后才能进一步纯化。
脱盐有多种方法,本实验采用凝胶层析法。
凝胶层析法主要是根据混合物中各种物质分子大小的不同而将其分离的技术。
凝胶层析分离示意图
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凝胶层析分离化合物示意图
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(离子交换层析)
离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换,利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离
R-SO3-H+ + Pr+
R-SO3-Pr+ + H+
阳离子交换
阴离子交换
R-N+R3OH- + Pr -
R-N+R3Pr - + OH-