人肺炎衣原体抗体Cpn-Ab试剂盒使用方法.doc

人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)试剂盒使用方法检测范围:96T4pg/ml-120pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)含量。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)水平。用纯化的人肺炎衣原体(Cpn)抗原包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab),再与HRP标记的人肺炎衣原体(Cpn)抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(240pg/ml)×1瓶3酶标包被板12孔××1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15pg/:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准